[发明专利]一种猫传染性腹膜炎卵黄抗体组合物及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种猫传染性腹膜炎卵黄抗体组合物，其特征在于，所述猫传染性腹膜炎卵黄抗体组合物是将猫肠道冠状病毒S蛋白卵黄抗体与Ⅰ型猫传染性腹膜炎病毒S蛋白卵黄抗体及Ⅱ型猫传染性腹膜炎病毒S蛋白卵黄抗体按相同效价下以2：1：1的质量比混合获得；

所述猫肠道冠状病毒S蛋白卵黄抗体为通过重组猫肠道冠状病毒S蛋白免疫卵生动物后，再从卵生动物生产的蛋黄中提取获得；

所述重组猫肠道冠状病毒S蛋白是以猫肠道冠状病毒毒株的S蛋白为参考，根据其基因序列，经宿主菌密码子优化后获得编码基因序列而获得的重组蛋白，编码该蛋白的基因的核酸序列如SEQ ID NO.1所示；

具体制备方法，包括如下步骤：

（1）分别制备重组猫肠道冠状病毒S蛋白、重组Ⅰ型猫传染性腹膜炎病毒S蛋白及重组Ⅱ型猫传染性腹膜炎病毒S蛋白，备用，步骤包括：

分别取编码猫肠道冠状病毒毒株S蛋白、Ⅰ型猫传染性腹膜炎病毒S蛋白及Ⅱ型猫传染性腹膜炎病毒S蛋白的基因序列，并做大肠杆菌密码子优化，获得目的蛋白的核酸序列；

对目的蛋白的核酸序列进行人工合成，连接到原核表达质粒pET32a中，获得含有目的基因的pET32a质粒，将含有目的基因的pET32a质粒用热击法导入到Rosetta-gami2表达菌中，涂布于氨苄抗性的LB琼脂平板上，挑取阳性菌落，分别获得rFECV-S工程菌、rFIPVⅠ-S工程菌以及rFIPVⅡ-S工程菌；

分别取rFECV-S工程菌、rFIPVⅠ-S工程菌以及rFIPVⅡ-S工程菌进行发酵培养和纯化，即得重组猫肠道冠状病毒S蛋白、重组Ⅰ型猫传染性腹膜炎病毒S蛋白及重组Ⅱ型猫传染性腹膜炎病毒S蛋白；

（2）将重组猫肠道冠状病毒S蛋白、Ⅰ型猫传染性腹膜炎病毒S蛋白及重组Ⅱ型猫传染性腹膜炎病毒S蛋白分别对卵生动物进行免疫，至卵生动物血清抗体效价达到1：32以上时收集卵生动物的蛋；

（3）将收集到的蛋的蛋黄液分别进行纯化获得猫肠道冠状病毒S蛋白卵黄抗体、Ⅰ、Ⅱ型猫传染性腹膜炎病毒S蛋白卵黄抗体及Ⅱ型猫传染性腹膜炎病毒S蛋白卵黄抗体；

（4）将猫肠道冠状病毒S蛋白卵黄抗体与Ⅰ型猫传染性腹膜炎病毒S蛋白卵黄抗体及Ⅱ型猫传染性腹膜炎病毒S蛋白卵黄抗体按相同效价下以2：1：1的质量比混合获得所述猫传染性腹膜炎卵黄抗体组合物。

2.根据权利要求1所述的一种猫传染性腹膜炎卵黄抗体组合物，其特征在于，所述Ⅰ型猫传染性腹膜炎病毒S蛋白卵黄抗体及Ⅱ型猫传染性腹膜炎病毒S蛋白卵黄抗体是分别将重组Ⅰ型猫传染性腹膜炎病毒S蛋白和重组Ⅱ型猫传染性腹膜炎病毒S蛋白分别免疫卵生动物后，从卵生动物生产的蛋黄中提取得到的。

3.一种如权利要求1-2任一所述的猫传染性腹膜炎卵黄抗体组合物的制备方法。

4.根据权利要求3所述的猫传染性腹膜炎卵黄抗体组合物的制备方法，其特征在于，所述卵生动物为鸡。

5.一种如权利要求1-2任一所述的猫传染性腹膜炎卵黄抗体组合物在制备猫传染性腹膜炎治疗药物中的应用。