[发明专利]提取指甲游离缘核DNA的方法及应用

说明书

本发明公开了一种提取指甲游离缘核DNA的方法及应用，将靠近指端的指甲剪成小块，在提前预冷至‑70℃～‑60℃的冷冻研磨仪中研磨成粉末后，高速离心；加入消化液，对指甲进行消化；高速离心，取上清，即得。本发明的提取指甲游离缘核DNA的方法，可以大大增加指甲游离缘核DNA提取的成功率，且提取出的游离缘核DNA的STR分型图谱合格，可用的概率大大提高，减少了重新提取率及重复采样的概率。整个提取流程变得简单化，减少有机试剂使用过程中对身体造成危害，且同时成本低廉。

技术领域

本发明属于生物技术领域，更具体地，本发明涉及一种从指甲游离缘中提取核DNA的方法，及其应用。

背景技术

法医物证学是法医学的分支科学，是研究应用生命科学技术解决案件中与人体有关的生物检材鉴定的一门科学，是以生物检材的成分和特征来证明案件事实，生物检材通常包括血液、精液、阴道分泌物，唾液、羊水及其斑痕；毛发、指甲、骨骼和牙齿；人体各种组织、器官及其碎块等。法医物证学检验的主要任务是解决司法实践中的个人识别和亲权鉴定问题。

随着DNA遗传标记的日渐深入，DNA分型已经成为法医物证检验的主要手段。通过DNA分型而不用通过测定全基因组序列来进行个人识别。DNA分型的优点还在于能从任何含有细胞的体液或组织中得到相同的结果，因而，在实际鉴定工作中，对于检材的选取就有了优劣之分了。而指甲常常因为它的无创性、隐蔽性，和易于获取等特点成为被鉴定人首选的检材。并且指甲易于保管和运输，对于病重或有输血史的患者也可选取指甲作为鉴定检材。指甲的抗腐败力强，故而也可作为尸体的检材选取。

指甲是由表皮细胞角化而成，有多层连接牢固的角化细胞构成，细胞内富含角质蛋白，包括游离缘、甲体、甲根三个部分。在一些刑事案件的检案过程中，指甲DNA检验需要拔取整枚指甲，消化指甲的甲体或甲根部分才能取得满意的DNA检验结果。但在亲子鉴定领域，拔取整枚指甲进行鉴定不合实际，一般情况下，只能获得指甲的游离缘进行鉴定。指甲游离缘下部无支撑，指甲细胞缺乏甲床的营养供给，因此，相对于指甲的其他部分，细胞角化程度更高，细胞核退化，核DNA降解得更为严重，从而含量非常低，使得DNA提取难度很大，同时因为指甲游离缘结构致密，又加大了DNA的提取难度。

目前提取指甲DNA，一般都选用有机法结合Chelex-100提取法、Chelex-100联合吸附柱法或者用磁珠法，这些方法前处理操作步骤繁多：一般先将适量指甲放入高速离心管，加入1.5mL 10％SDS，震荡浸泡约30min，去离子水反复浸泡洗涤2-3次，再用双蒸水漂洗2-3次，待干燥后，用眼科剪剪成小块。这一系列操作下来，耗时比较长，容易造成污染，难以提出足够量的DNA，导致实验扩增效果差，难以电泳出完整图谱。而且有机溶剂对身体会造成一定程度的危害。市面上也有指甲游离缘的DNA提取试剂盒，但价格昂贵成本高。

因此，由于指甲游离缘的结构特殊，提取DNA困难，目前还没有被普遍作为法医物证学优选的鉴定检材。探索一种简单、准确而又成本低廉的提取DNA的方法，非常有意义。

发明内容

基于此，本发明的目的之一在于提供一种提取指甲游离缘核DNA的方法，所述方法可以大大提高提取游离缘核DNA的成功率和质量，且简单、快捷、无需使用有机溶剂。

实现上述发明目的的具体技术方案包括如下：

一种提取指甲游离缘核DNA的方法，包括以下步骤：

(1)、将靠近指端的指甲剪成小块，在提前预冷至-70℃～-60℃的冷冻研磨仪中冷冻研磨成粉末后，高速离心；

(2)、加入消化液，对指甲进行消化；

(3)、高速离心，取上清，即得。

在其中一些实施例中，步骤(1)中所述冷冻研磨仪提前预冷至-66℃～-64℃。