[发明专利]提取指甲游离缘核DNA的方法及应用在审
| 申请号： | 202210541747.2 | 申请日： | 2022-05-17 |
| 公开（公告）号： | CN114736898A | 公开（公告）日： | 2022-07-12 |
| 发明（设计）人： | 朱素洁;冼汉福;詹益鑫;何雪葵;伍新尧;朱晓霞;夏宇跃;杨万丰;陈年亮;严婷 | 申请（专利权）人： | 广州金域司法鉴定技术有限公司;深圳金域医学检验实验室;广州金域医学检验中心有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 广州广典知识产权代理事务所(普通合伙) 44365 | 代理人： | 顾书玲 |
| 地址： | 510000 广东省广州*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 提取 指甲 游离 dna 方法 应用 | ||
1.一种提取指甲游离缘核DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)、将靠近指端的指甲剪成小块，在提前预冷至-70℃～-60℃的冷冻研磨仪中冷冻研磨成粉末后，高速离心；
(2)、加入消化液，对指甲进行消化；
(3)、高速离心，取上清，即得。
2.根据权利要求1所述的提取指甲游离缘核DNA的方法，其特征在于，步骤(1)中所述冷冻研磨仪提前预冷至-66℃～-64℃。
3.根据权利要求1所述的提取指甲游离缘核DNA的方法，其特征在于，步骤(1)中所述冷冻研磨的参数包括：运行频率：70Hz～80Hz；运行时间：50s～70s；停止时间：10s～20s；循环次数：6次～10次。
4.根据权利要求3所述的提取指甲游离缘核DNA的方法，其特征在于，所述冷冻研磨的参数包括：运行频率：74Hz～76Hz；运行时间：55s～65s；停止时间：14s～16s；循环次数：7次～9次。
5.根据权利要求1～4任一项所述的提取指甲游离缘核DNA的方法，其特征在于，步骤(2)中所述消化包括：于54℃～58℃初次消化6小时～24小时，再于100℃再次消化6min～10min。
6.根据权利要求5所述的提取指甲游离缘核DNA的方法，其特征在于，加入消化液后，震荡混匀离心8s～12s后再进行初次消化；和/或，初次消化后，震荡混匀离心8s～12s后进行再次消化。
7.根据权利要求1～4任一项所述的提取指甲游离缘核DNA的方法，其特征在于，步骤(3)中所述消化液包括：3wt％～7wt％Chelex-100悬液350μL～450μL、8mg/mL～12mg/mL蛋白酶K液8μL～12μL、0.8mol/L～1.2mol/L二硫苏糖醇8μL～12μL。
8.根据权利要求1～4任一项所述的提取指甲游离缘核DNA的方法，其特征在于，步骤(1)中，在指甲剪成小块前，先用手术刀片刮干净指甲表面；
和/或，步骤(1)中所述高速离心的速度为10000r/min～14000r/min，时间为2min～4min；
和/或，步骤(3)中所述高速离心的速度为10000r/min～14000r/min，时间为2min～4min。
9.权利要求1～8任一项所述的方法提取到的指甲游离缘核DNA。
10.权利要求9所述的指甲游离缘核DNA在法医物证检验中的应用。
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