[发明专利]一种抗HIV病毒药物评价动物模型的建立方法及其应用

权利要求书

1.一种抗HIV病毒药物评价动物模型的建立方法，所述方法以NPG小鼠作为构建基础，其包括如下步骤：

(1)通过尾静脉注射方法注射人源外周血PBMC细胞和/或脐带血CBMC细胞，检测小鼠体内hCD45⁺细胞比例，当hCD45⁺细胞比例达到30％以上，判断人源化小鼠模型构建成功；

(2)针对人源化小鼠模型构建成功的小鼠，通过腹腔注射HIV-Nanoluc病毒液进行感染，感染后每周进行成像检测病毒在体内的增殖情况，当荧光信号ROI值达到10⁶～10⁷photons/s为抗HIV病毒药物评价动物模型建模成功；

所述HIV-Nanoluc病毒液具有SEQ ID NO.7所示的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的方法，所述人源外周血PBMC细胞的提取包括如下步骤：

采集健康人外周血于肝素抗凝剂中混匀，离心分离收集上层血浆备用，其余血液成分和预热至室温的PBS进行1:0.5-2的体积比例进行混合，平铺于Ficoll淋巴细胞分离液上形成清晰的分离界面，离心，吸取中间的白膜层于洁净的离心管中，加入PBS清洗，离心弃上清，清洗1-3次。

3.根据权利要求1所述的方法，所述人源脐带血CBMC细胞的提取包括如下步骤：

采集健康人脐带血于肝素抗凝剂中混匀，离心分离收集上层血浆备用，其余血液成分和预热至室温的PBS进行1:0.5-2的体积比例进行混合，平铺于Ficoll淋巴细胞分离液上形成清晰的分离界面，离心，吸取中间的白膜层于洁净的离心管中，加入PBS清洗，离心弃上清，清洗1-3次。

4.根据权利要求1所述的方法，所述尾静脉注射人源PBMC或CBMC细胞4-6×10⁶cell/只。

5.根据权利要求1所述的方法，所述射HIV-Nanoluc病毒液的注射量为5-10μg/只。

6.权利要求1-5任意一项所述方法建立的动物模型的应用，所述动物模型用于抗HIV药物的筛选。

7.根据权利要求6所述的应用，所述抗HIV药物为VRC01-CAR-CD3⁺T细胞制剂，所述VRC01-CAR-CD3⁺T细胞制剂VRC01-CAR慢病毒转导CD3阳性细胞获得，所述VRC01-CAR慢病毒由信号肽SP1、抗HIV gp120抗原特异性单链抗体VRC01、标签信号Strep tag II、连接肽、CD8铰链区、CD28跨膜区、4-1BB共刺激结构域以及CD3ζ胞内信号传导结构域组成。