[发明专利]狂犬病病毒重组丝状病毒或沙粒病毒假病毒及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及病毒基因工程技术领域，具体涉及狂犬病病毒重组丝状病毒或沙粒病毒假病毒及其制备方法和应用。本发明提供的重组狂犬病病毒载体为包含重组狂犬病病毒基因组DNA表达盒的哺乳动物表达质粒；所述表达盒包含重组狂犬病病毒基因组DNA和调控元件。由该重组狂犬病病毒载体拯救获得狂犬病病毒重组丝状病毒或沙粒病毒假病毒具有较高的拯救效率，制备的假病毒为复制增殖型假病毒，在体外培养过程中能够进行复制增殖并获得较高的病毒滴度，可作为沙粒病毒和丝状病毒野毒的替代物，用于检测沙粒病毒和丝状病毒的中和抗体及其效价，安全性较高且能够实现便捷的荧光可视化检测。

技术领域

本发明涉及病毒基因工程技术领域，具体涉及狂犬病病毒重组丝状病毒或沙粒病毒假病毒及其制备方法和应用。

背景技术

拉沙热(Lassa fever,LF)是一种以出血热和多器官衰竭为特征的烈性、高致死率的人兽共患病，其病原是拉沙病毒(Lassa fever virus,LASV)，是沙粒病毒科，旧世界病毒属的成员之一。该病毒被列为生物安全四级病原体，在2001年4月《禁止生物武器公约》中被列入禁止使用的生物武器名录。LASV通过其天然宿主多乳鼠(Mastomys natalensis)的尿液或者粪便传播给人类。马尔堡病毒(Marburg virus，MARV)是一种有包膜的负链RNA病毒，是丝状病毒科、马尔堡病毒属成员之一。马尔堡出血热是一种由马尔堡病毒(Marburgvirus，MARV)在人类和非人类灵长动物中引起致命的病毒性出血热，该疾病与埃博拉病毒病的临床症状十分相似。拉沙病毒和马尔堡病毒可通过直接或间接接触带毒动物尸体或分泌物发生感染，也可通过气溶胶进行传播。目前尚无获批可应用于临床的疫苗或药物。此外，拉沙热病毒和马尔堡病毒因其高传染性、高致死性均被列为生物安全四级病原体，是国际禁止的生物武器，同时也被WHO列为“预防传染病研发行动蓝图”计划中优先研究的病原体。

目前国际上拉沙病毒和马尔堡病毒的中和抗体检测方法多以实毒中和实验以及假病毒中和实验这两种检测方法为主，虽然拉沙病毒和马尔堡病毒实毒中和抗体检测方法对中和抗体效价评估准确性较高。但是，生物安全四级实验室资源以及拉沙病毒和马尔堡病毒实毒资源的匮乏已成为阻碍针对拉沙病毒和马尔堡病毒这类高危病原体预防性疫苗和治疗性抗体药物开发和有效性评价的主要因素之一。假病毒作为实毒的替代物，可较好的模拟拉沙病毒和马尔堡病毒入侵和感染特性，且在生物安全二级实验室(BiosafetyLevel 2 Laboratory,BSL-2)即可操作，极大地降低了检测成本和病毒操作的生物安全风险。目前，研究者多用HIV和VSV载体包装的假病毒对中和抗体的中和能力进行评价，但是这两种包装载体多产生复制缺陷型假病毒，包装后所得病毒粒子无法进行体外扩增因此需要“现用现拯救”，且包装效率不稳定，拯救获得的假病毒滴度不高且一致性较差，当检测中和抗体的样本量过大时，假病毒量难以满足实验需求，大大增加了工作的繁琐程度和工作量。此外，HIV和VSV两种假病毒系统多使用萤火虫荧光素酶报告基因，在实际检测血清中和抗体效价时，需先裂解被假病毒感染的靶细胞，再使用荧光素酶底物作用，而后通过荧光检测仪测定相对光度值强度，进而判断待检样品在各稀释度下与假病毒的中和情况。这种中和抗体检测方法亦存在检测时间长、步骤繁琐、检测成本十分昂贵等弊端，不适用于样本的大规模检测。因此，开发新的假病毒体系对于拉沙病毒和马尔堡病毒的中和抗体检测以及推动拉沙病毒和马尔堡病毒诊断技术、预防性疫苗和治疗性抗体的研发具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供重组狂犬病病毒载体、狂犬病病毒重组丝状病毒或沙粒病毒假病毒及其制备方法和应用。