[发明专利]狂犬病病毒重组丝状病毒或沙粒病毒假病毒及其制备方法和应用

权利要求书

1.重组狂犬病病毒载体，其特征在于，所述载体为包含重组狂犬病病毒基因组DNA表达盒的哺乳动物表达质粒；

所述表达盒包含重组狂犬病病毒基因组DNA和调控元件；

所述重组狂犬病病毒基因组DNA为将狂犬病病毒SRV9基因组中的狂犬病病毒糖蛋白编码基因替换为拉沙病毒Josiah株或马尔堡病毒Musoke株、Angola株或Ravn株的囊膜糖蛋白编码基因，并在狂犬病病毒基因组中的磷蛋白编码基因与基质蛋白编码基因之间插入荧光标记蛋白编码基因eGFP得到；

所述调控元件包括位于所述重组狂犬病病毒基因组DNA上游的顺次连接的CMV启动子、T7启动子和锤头型核酶序列以及位于所述重组狂犬病病毒基因组DNA下游的顺次连接的丁肝病毒核酶序列、T7终止子和poly (A)加尾信号序列元件。

2.狂犬病病毒重组拉沙病毒或马尔堡病毒假病毒，其特征在于，所述假病毒的基因组包含重组狂犬病病毒基因组DNA；

所述重组狂犬病病毒基因组DNA为将狂犬病病毒SRV9基因组中的狂犬病病毒糖蛋白编码基因替换为拉沙病毒Josiah株或马尔堡病毒Musoke株、Angola株或Ravn株的囊膜糖蛋白编码基因，并在狂犬病病毒基因组中的磷蛋白编码基因与基质蛋白编码基因之间插入荧光标记蛋白编码基因eGFP得到；

所述假病毒的制备方法包括：将权利要求1所述的重组狂犬病病毒载体和辅助质粒导入宿主细胞中，得到重组宿主细胞，培养重组宿主细胞并收获释放的病毒粒子；

所述辅助质粒为分别表达狂犬病病毒的RNA聚合酶、核蛋白、磷蛋白和糖蛋白的四个哺乳动物表达质粒；

在导入宿主细胞过程中，所述重组狂犬病病毒载体的用量为2~3μg，表达狂犬病病毒的核蛋白的辅助质粒的用量为0.1~0.2μg，表达狂犬病病毒的磷蛋白的辅助质粒的用量为0.6~0.7μg，表达狂犬病病毒的RNA聚合酶的辅助质粒的用量为0.25~0.3μg，表达狂犬病病毒的糖蛋白的辅助质粒的用量为3~4μg。

3.权利要求2所述的狂犬病病毒重组拉沙病毒或马尔堡病毒假病毒的制备方法，其特征在于，所述方法包括：将权利要求1所述的重组狂犬病病毒载体和辅助质粒导入宿主细胞中，得到重组宿主细胞，培养重组宿主细胞并收获释放的病毒粒子；

所述辅助质粒为分别表达狂犬病病毒的RNA聚合酶、核蛋白、磷蛋白和糖蛋白的四个哺乳动物表达质粒；

在导入宿主细胞过程中，所述重组狂犬病病毒载体的用量为2~3μg，表达狂犬病病毒的核蛋白的辅助质粒的用量为0.1~0.2μg，表达狂犬病病毒的磷蛋白的辅助质粒的用量为0.6~0.7μg，表达狂犬病病毒的RNA聚合酶的辅助质粒的用量为0.25~0.3μg，表达狂犬病病毒的糖蛋白的辅助质粒的用量为3~4μg。

4.权利要求1所述的重组狂犬病病毒载体或权利要求2所述的狂犬病病毒重组拉沙病毒或马尔堡病毒假病毒的以下任一种应用：

（1）在非疾病诊断目的的检测或筛选马尔堡病毒或拉沙病毒的中和抗体中的应用；

（2）在制备用于检测马尔堡病毒或拉沙病毒的中和抗体的试剂中的应用；

（3）在制备用于检测马尔堡病毒或拉沙病毒的试剂中的应用；

（4）在制备用于诊断马尔堡病毒或拉沙病毒感染或由马尔堡病毒或拉沙病毒感染引起疾病的试剂中的应用。

5.马尔堡病毒或拉沙病毒的中和性抗体检测试剂，其特征在于，所述试剂包含权利要求2所述的狂犬病病毒重组拉沙病毒或马尔堡病毒假病毒。