[发明专利]一株分泌抗丙炔氟草胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用

说明书

本发明提供了一株分泌抗丙炔氟草胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫检测领域。本发明分泌抗丙炔氟草胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCCNo.22334。本发明获得的抗丙炔氟草胺单克隆抗体细胞株可用于食品安全检测中丙炔氟草胺残留分析检测，其对丙炔氟草胺有较好的检测灵敏度和特异性(ICsubgt;50/subgt;值为0.59ng/mL)。本发明成果可用制备丙炔氟草胺的免疫检测试剂盒，为谷物、油料、蔬菜、水果、调味料以及生乳中丙炔氟草胺残留量的检测提供有力的检测方法与手段。

技术领域

本发明属于食品中农药残留的快速检测技术领域，尤其是涉及一株分泌抗丙炔氟草胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。

背景技术

丙炔氟草胺(flumioxazin，简称FLU)，商品名Sumisoya、速收，是日本住友化学工业株式会社开发的环酰亚胺类除草剂。丙炔氟草胺为原卟啉原氧化酶抑制剂，是触杀型选择性除草剂，使用后会在土壤表面形成处理层，杂草幼苗接触后会引起植物体内的原卟啉积累，使细胞膜脂质过氧化作用增强，从而导致敏感杂草的细胞膜结构与细胞功能产生不可逆损害，在24～48h内敏感杂草幼苗就会由凋萎、白化到坏死及枯死。其目前已在多个国家上市，主要用来防除大豆、棉花、葡萄和其他许多作物田中的阔叶杂草。

测定丙炔氟草胺含量的分析方法目前研究较少，主要有气相色谱-串联质谱法(GC-MS/MS)和高效液相色谱法(HPLC-UV)等仪器方法，这些检测方法具有耗时、步骤繁琐、无法进行现场快速检测、成本高等缺点，因此建立快速简便的丙炔氟草胺检测方法具有重要意义。酶联免疫法(ELISA)是一种极为高效、敏感、快速的检测方法，适用于大量样本的现场快速检测，为丙炔氟草胺检测提供了一种新的检测途径。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一株分泌抗丙炔氟草胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。

本发明的第一个目的在于提供一株分泌抗丙炔氟草胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株于2021年05月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号CGMCC No.22334，所述杂交瘤细胞株分类命名为单克隆细胞株。

本发明的第二个目的在于提供一种分泌抗丙炔氟草胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株的制备方法，包括以下步骤：

S1：取杂环酮、硫羧酸溶于有机溶剂中，并加入碳酸钾，加热回流反应，待反应结束后将反应液分离纯化得到丙炔氟草胺半抗原FLU-COOH；

S2：利用S1中所述丙炔氟草胺半抗原制备丙炔氟草胺完全抗原，将丙炔氟草胺完全抗原与完全弗氏佐剂制备得到免疫原1，所得丙炔氟草胺完全抗原和不完全弗氏佐剂乳化得到免疫原2；

S3：将S2中所得免疫原1对小鼠进行皮下免疫；

S4：将S3中免疫后的小鼠使用S2中免疫原2再进行加强免疫，并使用丙炔氟草胺完全抗原进行冲刺免疫；

S5：取S4中冲刺免疫后的小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞，进行细胞融合，得到所述杂交瘤细胞株。

在本发明的一个实施例中，S1中所述杂环酮的结构式为：

其中

在本发明的一个实施例中，S1中所述硫羧酸如式(1)-式(2)所示：

其中n＝1-6。

在本发明的一个实施例中，S1中所述丙炔氟草胺与硫羧酸的质量之比为1:0.8-3。

在本发明的一个实施例中，S1中所述有机溶剂为DMSO、乙二醇和DMF中的一种或多种。