[发明专利]一种抗猪CD164L2单克隆抗体制备与应用

说明书

本发明公开了一种抗猪CD164L2单克隆抗体制备，包括以下制备步骤：从NCBI基因库中获取查找猪源CD164L2的基因序列，合成pIRES2‑CD164L2‑EGFP质粒；进行质粒的扩增；以表示CD164L2蛋白的表达情况；在质粒转染48小时后，CD164L2的L929细胞与CpG1826佐剂混合后，通过背部皮下多点注射免疫途径免疫8周龄Balb/c小鼠，经过3次加强免疫后，收集血清获得多克隆抗体，将多抗血清与表达CD164L2蛋白的人293T细胞做流式结合检测；选择结合程度最好的小鼠进行杂交瘤融合，4次流式检测筛选，获得单克隆抗体，不仅为深入研究CD164L2蛋白的分子机制奠定基础，而且为研究猪DC5的亚群鉴定、发育和功能研究提供有效的抗体材料，及为抗体介导的靶向免疫细胞的疫苗研制提供新的设计思路，具有比较重要的科学价值。

技术领域

本发明涉及与猪CD164L2结合的抗体技术领域，具体是指一种抗猪CD164L2单克隆抗体制备与应用。

背景技术

树突状细胞是专职的抗原提呈细胞，是连接先天免疫和适应性免疫反应的桥梁，其具有异质性，不同的树突状细胞亚群具有不同的功能特性，在机体的免疫过程中发挥不同的功能，比如Ⅰ型树突状细胞诱导CD8+T细胞的增殖和活化，发挥细胞毒性的作用；Ⅱ型树突状细胞诱导CD4+T细胞的增殖和分化；浆细胞样树突状细胞则在抗病毒的过程中产生大量的干扰素，从而抑制病毒的增殖。因此，对树突状细胞亚群的鉴定及功能的研究，首先是要对其进行分群鉴定，而可用的商品化猪抗体较少，因此我们前期的工作就是根据不同树突状细胞亚群的特征性表面分子的基因表达差异，制备大量的猪抗体，包括CD164L2。为后期不同树突状细胞亚群的鉴定，以及为后续靶向特定树突状细胞亚群，增强抗原提呈能力，进而机体的免疫力等功能研究提供抗体支持。本发明的抗猪CD164L2抗体主要是用于除此之外，在临床医学的研究中，可用于血液蛋白、血压、脉冲压力的检测，可以用于单细胞计数，单细胞计数是高血压、重度抑郁症、炎症、心血管疾病临床研究的潜在标志物。

本发明是基于猪外周血树突状细胞的单细胞数据的结果分析，发现CD164L2在某个树突状细胞亚群上特异性高表达，而在其它树突状细胞亚群上低表达或不表达，因此我们实验室对CD164L2的抗体进行了制备。CD164L2是CD164的主要类似物，属于Ⅰ型跨膜蛋白。已经在mRNA水平上检测了CD164L2在各种猪组织中的表达，报道了CD164L2在皮下脂肪组织(subcutaneous adipose)、卵巢、肺脏中高表达，在脾脏中低表达，在心脏、肾脏、肝脏等组织中几乎不表达(Li,Chen etal.2017)。

在人的树突状细胞研究中，发现这群细胞在受到CpGA刺激时，分泌干扰素的水平介于经典树突状细胞和浆细胞样树突状细胞；在CpGB的刺激下，DC5产生炎性细胞因子的水平更高；以及活化T最强，且能诱导Th22细胞反应(Yu,Zhang et al.2015)。我们目前认为在猪外周血中新发现的这群细胞是人和小鼠DC5树突状细胞的同源物。CD164L2主要在新发现的这群猪树突状细胞亚群中高表达。已经有研究证明，疫苗靶向表达XCR1分子和MHCⅡ分子的树突状细胞(Fredriksen,Sandlie et al.2006,Bernelin-Cottet,Urien etal.2019)，能够显著提高疫苗效应，增强动物机体的免疫力。此CD164L2单抗的制备可以为之后的靶向疫苗的研究提供前期的支持。

目前关于树突状细胞的研究主要集中在人和小鼠的研究，对于动物，比如猪、牛、羊、禽类等，研究都比较少，还处于起步阶段，其根本原因在于抗体的研发较少，几乎没有，因此制备可使用的抗体成了未来研究的重中之重。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服以上技术缺陷，提供一种抗猪CD164L2单克隆抗体制备与应用，提供一个可结合猪CD164L2的单克隆抗体，不仅为深入研究CD164L2蛋白的分子机制奠定基础，而且为研究猪DC5的亚群鉴定、发育和功能研究提供有效的抗体材料，及为抗体介导的靶向免疫细胞的疫苗研制提供新的设计思路，具有比较重要的科学价值。