[发明专利]一种抗猪CD164L2单克隆抗体制备与应用在审
| 申请号： | 202210516764.0 | 申请日： | 2022-05-12 |
| 公开（公告）号： | CN114891107A | 公开（公告）日： | 2022-08-12 |
| 发明（设计）人： | 李焕荣;续田丽;聂晓华;张立国 | 申请（专利权）人： | 北京农学院 |
| 主分类号： | C07K16/28 | 分类号： | C07K16/28;C12N15/85;C07K16/06 |
| 代理公司： | 深圳国联专利代理事务所(特殊普通合伙) 44465 | 代理人： | 钟志芸 |
| 地址： | 102206 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 cd164l2 单克隆抗体 制备 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种抗猪CD164L2单克隆抗体制备，其特征在于：包括以下制备步骤：
步骤一：从NCBI基因库中获取查找猪源CD164L2的基因序列，合成pIRES2-CD164L2-EGFP质粒；
步骤二：在CD164L2蛋白C端加入了flag蛋白序列，以表征CD164L2蛋白的表达，构建了既可以检测GFP也检测flag的pIRES2-CD164L2-flag-EGFP质粒，将构建的重组质粒转化到TOP10感受态中，进行质粒的扩增；
步骤三：将质粒通过lipo2000转染到小鼠的L929细胞中，在真核细胞中进行蛋白的表达，通过检测GFP的指标，以表示CD164L2蛋白的表达情况；
步骤四：在质粒转染48小时后，将表达CD164L2的L929细胞与CpG1826佐剂混合后，通过背部皮下多点注射免疫途径免疫8周龄Balb/c小鼠，经过3次加强免疫后，收集血清获得多克隆抗体，将多抗血清与表达CD164L2蛋白的人293T细胞做流式结合检测；
步骤五：选择结合程度最好的小鼠进行杂交瘤融合，通过4次流式检测筛选，获得单克隆抗体。
2.一种如权利要求1所述抗猪CD164L2单克隆抗体的应用。
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