[发明专利]一种抗PEDV和PRV的二联病毒样颗粒疫苗及其制备方法

说明书

本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种抗PEDV和PRV的二联病毒样颗粒疫苗及其制备方法。本发明的病毒样颗粒含有猪轮状病毒的VP6蛋白和VP2蛋白，且所述VP6蛋白的loop区连接有猪流行性腹泻病毒的RBD。本发明所提供的二联病毒样颗粒及疫苗对猪流行性腹泻病毒和猪轮状病毒均具有很好的免疫原性，能诱导机体产生强效免疫应答，并形成较强的免疫保护。其不仅有利于在相关疾病的防控中节省劳力，提高工作效率，而且还解决了之前弱毒疫苗和灭活疫苗所具有的制备工艺复杂、有效性不佳、容易散毒等问题。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种抗PEDV和PRV的二联病毒样颗粒疫苗及其制备方法。

背景技术

目前市场上用于预防、控制猪流行性腹泻的疫苗基本都是传统猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)灭活疫苗和弱毒疫苗。但单价或多联灭活疫苗不能刺激动物机体产生足够量的sIgA抗体，保护效果不佳，且制苗成本也比较昂贵。同时，灭活疫苗在猪体内产生免疫力时间长达二周，需要提前接种，以保证预防效果。弱毒疫苗虽然可引起黏膜免疫，但由于存在着成本高、易返祖、有潜在毒力增强风险等缺陷，限制了其在生产中的应用。

发明内容

本发明利用猪轮状病毒(porcinerotavims，PRV)的病毒样颗粒(virus-likeparticle，VLP)作为核心VLP骨架，挑选出骨架表面不影响VLP结构的区域进行改造，并利用基因工程的手段将猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)的受体结合结构域通过蛋白质超级胶水的技术偶联到VLP表面待改造区，研制抗PEDV和PRV的二价VLP疫苗，能诱导机体产生强效的免疫应答，刺激机体产生足够量的抗猪流行性腹泻病毒和猪轮状病毒的保护性抗体。

具体而言，本发明首先提供了一种病毒样颗粒，其含有猪轮状病毒的VP6蛋白，且所述VP6蛋白的loop区连接有猪流行性腹泻病毒的RBD。

作为优选，所述VP6蛋白的loop区为loop1、loop3或loop4；

其中，所述loop1为VP6蛋白的第169-176位，所述loop3为VP6蛋白的第240-245位，所述loop4为VP6蛋白的第296-301位。

更优选为loop4时，VP6蛋白嵌合spytag后的表达量和可溶性更佳。

作为优选，所述VP6蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。

作为本发明的一个实施方式，所述loop1的氨基酸序列为SQPAHDNL，所述loop3的氨基酸序列为SAGGTT，所述loop4的氨基酸序列为RPPNMT。

作为本发明的一个实施方式，所述猪流行性腹泻病毒的RBD的氨基酸序列如SEQID No.3所示。

作为本发明的一个实施方式，所述的病毒样颗粒还含有猪轮状病毒的VP2蛋白。

作为本发明的一个实施方式，所述VP2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示。

作为本发明的一个实施方式，所述的病毒样颗粒含有VP6-spytag蛋白、VP2蛋白和spycatcher-RBD蛋白。

其中，所述VP6-spytag蛋白通过在猪轮状病毒的VP6蛋白的loop区嵌合spytag而得到，所述spycatcher-RBD蛋白通过将所述猪流行性腹泻病毒的RBD连接至spycatcher上而得到。

在本发明的一种优选实施方式中，所述spycatcher的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

在本发明的一种优选实施方式中，所述spytag的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。