[发明专利]GM-CSF抑制剂及其用途

说明书

本申请提供了一种GM‑CSF抑制剂及其用途，具体涉及一种分离的核酸分子，其用于在细胞内抑制GM‑CSF基因的表达，所述核酸分子包含反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸包含与SEQ ID NO:4所示核苷酸序列相差不超过3个核苷酸的至少15个连续核苷酸，所述反义寡核苷酸包含与编码GM‑CSF的mRNA的至少一部分互补的互补区域，所述互补区域的长度为17‑21个核苷酸。本申请还涉及所述核酸分子在制备CAR‑T细胞中的用途。与野生型T细胞相比，引入本申请所述的核酸分子的T细胞表达的GM‑CSF被下调，且不影响CAR的表达以及CAR‑T细胞的杀伤活性。

技术领域

本申请涉及生物医药领域，具体的涉及一种降低细胞因子释放综合症的GM-CSF抑制剂及其用途。

背景技术

嵌合抗原受体T（CAR-T）细胞疗法已成为治疗癌症的一种新颖的、潜在的革命性疗法。然而，CAR-T细胞疗法的广泛应用由于出现了潜在的致命毒副作用而受到限制。这包括在CAR-T治疗期间出现的细胞因子释放综合症（CRS）和神经毒性。在接受CART19细胞治疗的患者中，有高达50%的患者会出现3级或更高的CRS或神经毒性，并且已经有数起死亡报告。目前还没有预防CRS的有效疗法。

CRS的发展与体内T细胞扩增和T细胞效应细胞因子（如白细胞介素-6[IL-6]、干扰素-γ[IFN-γ]、单核细胞螯合蛋白1[MCP-1]和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子[GM-CSF]）的大量生产直接相关。此外，临床前实验表明，IL-6是CRS发展过程中的一个关键细胞因子，它不是由CAR-T细胞产生的；相反，它主要是由单核细胞和巨噬细胞产生。这些观察结果为研究GM-CSF的中和提供了坚实的理由，以作为降低CRS和与CAR-T细胞治疗相关的神经炎症（NI）的潜在策略。

发明内容

本申请目的在于提供一种降低GM-CSF在活化的CAR-T细胞中表达的可行方法，并可能有助于防止CRS的发生，从而提高CAR-T疗法的治疗效果。

本申请目的还在于提供一种降低GM-CSF表达的CAR-T细胞的制备方法，并可能有助于防止CRS的发生，对CAR分子的表达没有影响，对CAR-T细胞的杀伤效果几乎没有影响。

一方面，本申请提供一种分离的核酸分子，其用于在细胞内抑制GM-CSF基因的表达，所述核酸分子包含反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸包含与SEQ ID NO: 4所示核苷酸序列相差不超过3个核苷酸的至少15个连续核苷酸。

在某些实施方式中，其中所述反义寡核苷酸包含与编码GM-CSF的mRNA的至少一部分基本上互补的互补区域。

在某些实施方式中，其中所述互补区域的长度小于30个核苷酸。

在某些实施方式中，其中所述互补区域的长度为17-21个核苷酸。

在某些实施方式中，其中所述互补区域的长度为19个核苷酸。

在某些实施方式中，其中所述的核酸分子当与表达所述GM-CSF的细胞接触时抑制所述GM-CSF的表达至少20％。

在某些实施方式中，所述核酸分子为dsRNA。

在某些实施方式中，所述核酸分子为siRNA。

在某些实施方式中，所述siRNA包含正义链和反义链，所述反义链包含与编码GM-CSF的mRNA的至少一部分基本上互补的互补区域，且所述反义链包含与SEQ ID NO: 4所示核苷酸序列相差不超过3个核苷酸的至少15个连续核苷酸；所述正义链和反义链互补共同形成长度介于17到21个核苷酸的互补区域。

所述siRNA包含正义链和反义链，所述正义链包含SEQ ID NO: 10、或与其相差不超过3个核苷酸的序列，且所述反义链包含SEQ ID NO: 4或与其相差不超过3个核苷酸的序列。