[发明专利]一种解除胰腺癌免疫抑制性微环境的方法

说明书

本发明涉及一种解除胰腺癌免疫抑制性微环境的方法，属于生物技术领域，包括以下步骤：包括以下步骤：将荧光素酶稳转胰腺癌Panc02细胞注射到脾脏下极的模型小鼠胰腺中，建立原位Panc02小鼠胰腺癌模型,植入后第6天，通过在每个时间点注射荧光素并在暴露5s后通过IV I S系统成像来监测原位肿瘤生长,将出现肿瘤的小鼠分出；将Panc02细胞注射在上述的小鼠右侧背部，构建远处瘤模型；再注射磷脂包裹的六氟化硫微泡后对原位瘤进行超声空化处理；收集不同治疗的Panc02远处瘤进行转录组分析。本发明技术方案中。超声空化能够重塑肿瘤组织的基因表达谱，下调包括Foxp3、CD274和CTLA4等多个免疫检查点分子及一些共刺激分子，解除抑制性肿瘤免疫微环境。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地，涉及一种解除胰腺癌免疫抑制性微环境的方法。

背景技术

胰腺导管腺癌(PDAC)是全球第四大癌症相关死亡原因，受影响患者的5年生存率低于7％。80-85％的患者没有资格接受肿瘤切除或患有转移性疾病，这使得这种肿瘤类型的治疗极具挑战性。胰腺肿瘤通常表现为致密的细胞外基质，可压缩局部血管，导致灌注不足，从而限制化疗药物的释放。

现有技术中,大多数用于治疗PDAC的药物表现出较差的血浆稳定性、有限的细胞摄取以及较高的药物相关毒性和耐药性。因此，显然需要开发能够治疗PDAC和相关肿瘤类型的新型、毒性较小的治疗方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种解除胰腺癌免疫抑制性微环境的方法，利用超声介导的空化实现解除胰腺癌免疫抑制性微环境,没有毒性和副作用。

本发明要解决的技术问题：大多数用于治疗PDAC的药物表现出较差的血浆稳定性、有限的细胞摄取以及较高的药物相关毒性和耐药性。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

一种解除胰腺癌免疫抑制性微环境的方法，包括以下步骤：

S1、小鼠荧光素酶稳转胰腺癌Panc02细胞在DMEM中生长，添加质量分数为10％的FBS、1％的青霉素和链霉素,细胞在37℃的浓度为5％的CO₂培养箱中培养；

S2、将荧光素酶稳转胰腺癌Panc02细胞注射到模型小鼠胰腺中，建立原位Panc02小鼠胰腺癌模型,植入后第6天，通过在每个时间点注射荧光素并在暴露5s后通过IVIS系统成像来监测原位肿瘤生长,将出现肿瘤的小鼠分出；

S3、小鼠胰腺癌Panc02细胞在DMEM中生长，添加质量分数为10％的FBS、1％的青霉素和链霉素,细胞在37℃的浓度为5％的CO₂培养箱中培养；

S4、将Panc02细胞注射在上述的小鼠右侧背部，构建远处瘤模型；

S5、尾静脉注射100μL磷脂包裹的六氟化硫微泡(Sonovue^TM,Bracco,Italy)，随即即刻对胰腺癌原位肿瘤进行超声辐照(1.0MHz,0.5W/cm²,20％duty cycle)5min。

进一步的，收集不同治疗的Panc02肿瘤进行转录组分析(Novelbio Ltd.,China)，通过Illumina质量过滤器的高质量读数被保留用于序列分析并映射到GRCm38。

本发明的有益效果：

1、本发明技术方案中，超声空化能够重塑肿瘤组织的基因表达谱，下调包括Foxp3、CD274和CTLA4等多个免疫检查点分子及一些共刺激分子，解除抑制性肿瘤免疫微环境。

附图说明