[发明专利]一种同时检测赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的三维DNA纳米镊子及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种同时检测赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的三维DNA纳米镊子，其特征在于，所述三维DNA纳米镊子包含P1～P8共8条寡核苷酸链，其中P1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，P2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，P3的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，P4的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，P5的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，P6的核苷酸序列如SEQ IDNO.6所示，P7的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，P8的核苷酸序列如SEQ ID NO.87所示；

在P5和P6的核苷酸序列中各包含一个荧光基团和一个淬灭基团。

2.根据权利要求1所述三维DNA纳米镊子，其特征在于，所述荧光基团包括Cy5和Cy3；所述淬灭基团包括BHQ-3和BHQ-2。

3.根据权利要求1或2所述三维DNA纳米镊子，其特征在于，在P5的5’端连接Cy5，3’端连接BHQ-3；在P6的5’端连接BHQ-2，3’端连接Cy3。

4.权利要求1～3任一项所述三维DNA纳米镊子的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将P1～P8共8条寡核苷酸链等量混合后，依次经过95℃加热3min，65℃孵育3min，50℃孵育30min，37℃孵育30min和25℃孵育30min，得“打开”状态的三维DNA纳米镊子。

5.根据权利要求4所述制备方法，其特征在于，所述等量混合，包括将所述8条寡核苷酸链分别利用杂交缓冲液稀释成10μM，各取10μL进行混合。

6.权利要求1～3任一项所述三维DNA纳米镊子在同时检测赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮中的应用。

7.一种同时检测待测样品中赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)分别利用不同浓度的赭曲霉毒素A标准品和玉米赤霉烯酮标准品和“打开”状态的三维DNA纳米镊子在37℃孵育60min后，测量荧光强度并绘制标准曲线；

(2)将待测样品与“打开”状态的三维DNA纳米镊子在37℃孵育60min，将测量得到的荧光强度带入步骤(1)所述标准曲线，测定赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的存在和浓度。

8.根据权利要求7所述方法，其特征在于，所述赭曲霉毒素A标准品的浓度包括0.02ng/mL、0.1ng/mL、0.2ng/mL、1ng/mL、2ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、100ng/mL和200ng/mL；

所述玉米赤霉烯酮标准品的浓度包括0.05ng/mL、0.1ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL和500ng/mL。

9.根据权利要求7所述方法，其特征在于，所述待测样品包括食品。

10.根据权利要求7所述方法，其特征在于，测量荧光强度时，设定荧光分光光度计的参数如下：扫描速度为3000nm/min，激发波长、发射起始波长和终止波长分别为535、535和800nm，增益为15档。