[发明专利]一种红参寡糖同系物的制备方法与结构表征方法

说明书

本发明关于寡糖同系物制备及分析技术领域，尤其涉及一种红参寡糖同系物的制备方法与结构表征方法。本发明提供的红参寡糖同系物的制备方法通过三氟乙酸对红参多糖进行温和酸水解，进而使用超滤离心的技术对不同分子量水解多糖进行截留分段，获得分子量小于3000Da的寡糖，然后采用HILIC‑HPLC对其进行分离，能够同时制备出9个寡糖组分，且所得寡糖的纯度较高。本发明提供的结构表征方法综合采用HILIC/IM‑QTOF‑HDMSsupgt;E/supgt;、NMR、IR技术，能够对上述寡糖同系物的结构准确地进行表征。

技术领域

本发明关于寡糖同系物制备及分析技术领域，尤其涉及一种红参寡糖同系物的制备方法与结构表征方法。

背景技术

人参属中药中富含多种植物多糖类成分，其植物多糖在组成上多具有高分子量、多分枝、糖苷键类型复杂、由多种单糖组成的特点，其结构的复杂性导致其在结构确定过程中存在巨大困难。文献调研结果显示，组成人参属六种中药的多糖类成分有较大差异，但在单糖组成方面表现出良好的一致性，均以Glc为主要片段构成(约占总糖含量的90％，其它单糖的含量较低)，而红参中的多糖含量远高于其它五种中药。

根据现代药理学对于多糖类成分的研究内容可知：使用适当的解聚技术对多糖类成分进行解聚后，所获得的低聚寡糖类成分较原型有更好的药理活性。如临床上常用的抗凝血药物肝素的主要两个品种：低分子量肝素(Mw 3500-6000Da)和肝素戊糖(Mw 1508Da)，均具有良好的抗凝血活性；甘露特钠胶囊的有效活性成分为寡聚-β-1,4-D-甘醛酸二酸钠(Mw 670-880Da)，是由从褐藻中获得的甘露聚糖通过水解得到的，该寡糖成分可用于轻度至中度阿尔茨海默病，改善患者认知功能的作用。

发明内容

针对以上技术问题，本发明提供一种红参寡糖同系物的制备方法与结构表征方法，该制备方法能够同时制备出9个纯化寡糖同系物，通过该结构表征方法，能够准确地对每种寡糖同系物进行结构表征。

为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下的技术方案：

第一方面，本发明提供了一种红参寡糖同系物的制备方法，具体包括以下步骤：

S1、提取红参多糖；

S2、向所述红参多糖中加入三氟乙酸水溶液，加热水解，反应完成后将所得反应液去除溶剂，加水溶解后用截留分子量为3000Da的超滤离心管进行超滤截留，获得分子量小于3000Da的样品；

S3、将分子量小于3000Da的样品以水溶解，通过HILIC-HPLC进行寡糖的制备，根据出峰时间收集不同时间的洗脱液，将各洗脱液除去溶剂后即得红参寡糖同系物；所述HILIC-HPLC的色谱条件为：色谱柱：亲水相互作用色谱柱；A相：含有0.05％(v/v)甲酸的60％(v/v)乙腈水溶液；B相：0.05％(v/v)甲酸水溶液；制备梯度为：

流速2.0～3.0mL/min。

本发明通过三氟乙酸对制备的红参多糖进行温和酸水解，进而使用超滤离心的技术对不同分子量水解多糖进行截留分段，获得分子量小于3000Da的寡糖，然后采用HILIC-HPLC对分子量小于3000Da的寡糖进行分离，能够同时制备出9个寡糖组分，且所得寡糖的纯度较高。所得寡糖组分是具有α-D-Glc-α(1→4){-α-D-Glc-α(1→4)}_n-β-D-Glc通式的纯化寡糖同系物(n＝0,1,2,3…8)。

本发明首创的制备和分离寡糖的方法不仅为红参寡糖药理活性筛选提供了9种寡糖化合物，也为寡糖的分离和制备提供了新的思路和方案。