[发明专利]一种红参寡糖同系物的制备方法与结构表征方法

权利要求书

1.一种红参寡糖同系物的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

S1、提取红参多糖；

S2、向所述红参多糖中加入三氟乙酸水溶液，加热水解，反应完成后将所得反应液去除溶剂，加水溶解后用截留分子量为3000Da的超滤离心管进行超滤截留，获得分子量小于3000Da的样品；

S3、将分子量小于3000Da的样品以水溶解，通过HILIC-HPLC进行寡糖的制备，根据出峰时间收集不同时间的洗脱液，将各洗脱液除去溶剂后即得红参寡糖同系物；

所述HILIC-HPLC的色谱条件为：

色谱柱：XBridge BEH Amide OBD Prep Column，30×250mm，5μm；

流动相A：含有0.05％v/v甲酸的60％v/v乙腈水溶液；流动相B：0.05％v/v甲酸水溶液；制备梯度为：

流速2.0～3.0mL/min。

2.根据权利要求1所述的红参寡糖同系物的制备方法，其特征在于，S1中提取红参多糖的方法为：将红参粉碎后以水提取，得水提液，向所述水提液中加入乙醇至乙醇含量为75％～85％v/v，沉淀后将所得沉淀干燥，以水复溶后加入Sevage试剂，混合后离心，将上清液用截留分子量为3500Da的透析袋透析，将截留液干燥，得红参多糖。

3.根据权利要求1所述的红参寡糖同系物的制备方法，其特征在于，S2中三氟乙酸水溶液中三氟乙酸的浓度为0.45～0.55M。

4.根据权利要求3所述的红参寡糖同系物的制备方法，其特征在于，S2中加热的温度为70～90℃，水解时间为2.5～3.5h。

5.根据权利要求1所述的红参寡糖同系物的制备方法，其特征在于，S3中流速为2.5mL/min，在此流速下，分别在9.2→10.5min，10.5→12.5min，13→15min，16→18min，19→21min，22→25min，26→31min，32→37min，38→45min收集洗脱液。

6.以权利要求1～5任一项所述制备方法制得的红参寡糖同系物的结构表征方法，其特征在于，用HILIC/IM-QTOF-HDMSE液相-质谱分析方法对上述红参寡糖同系物进行质量数分析，用红外光谱和核磁共振波谱进行结构分析；在用HILIC/IM-QTOF-HDMS^E液相-质谱进行检测之前，用HILIC-UPLC-ELSD方法对所述红参寡糖同系物进行纯度检测，具体包括以下操作：

将待测样品用乙腈水溶液溶解，用HILIC-UPLC-ELSD方法进行检测；

所述HILIC-UPLC-ELSD方法中的液相色谱条件为：

色谱柱为Exsil 100HAAX，2.0×100mm，1.5μm；

流动相A为水，流动相B为乙腈，进行线性梯度洗脱，所述线性梯度洗脱的程序如下：

柱温为35～45℃；

流速为0.25～0.35mL/min。

7.根据权利要求6所述的结构表征方法，其特征在于，所述HILIC/IM-QTOF-HDMS^E液相-质谱分析方法中的液相色谱条件为；

色谱柱：ACQUITY UPLC BEH Amide Column，2.1×100mm，1.7μm；

流动相A为0.1％v/v甲酸水溶液，流动相B为0.1％v/v甲酸乙腈溶液，进行线性梯度洗脱，所述线性梯度洗脱的程序如下：

流速：0.28～0.32mL/min；

柱温：35～45℃。