[发明专利]检测猫疱疹病毒和猫杯状病毒的引物探针组合物、试剂盒及其制备方法

说明书

本发明提供检测猫疱疹病毒和猫杯状病毒的引物探针组合物、试剂盒及其制备方法，所述引物探针组合物包括用于检测猫疱疹病毒I型的引物、用于检测猫杯状病毒的引物、用于监测反应体系内抑制情况的引物、用于检测猫疱疹病毒I型的探针、用于检测猫杯状病毒的探针、用于监测反应体系内抑制情况的探针。采用本发明可同时检测猫疱疹病毒和猫杯状病毒，并且特异性强、敏感性高、快速、安全。

技术领域

本发明涉及核酸检测技术领域，尤其是涉及检测猫疱疹病毒和猫杯状病毒的引物探针组合物、试剂盒及其制备方法。

背景技术

猫疱疹病毒I型(Feline herpesvirus type1，FHV1)属于大型的病毒(100～130nm直径)，为疱疹病毒科中的甲型疱疹病毒亚科、水痘属；感染病毒后常患猫病毒性鼻气管炎（简称猫鼻支），是目前已知最重要的猫呼吸道疾病之一，该病上呼吸道症状表现明显，主要表现为咳嗽、打喷嚏、眼睛、鼻子分泌物增多、结膜炎、角膜炎等。

猫杯状病毒(Feline Calicivirus，FCV)为无囊膜的单股正链RNA病毒，是猫杯状病毒科、杯状病毒属的一员，猫杯状病毒感染是猫病毒性呼吸道传染病，主要表现为上呼吸道症状，即精神沉郁、浆液性和粘液性鼻漏、结膜炎、口腔炎、气管炎、支气管炎，伴有双相热；是猫的多发病，发病率高，死亡率低。

猫杯状病毒与猫疱疹病毒I型引发的猫传染性鼻气管炎的症状类似，很难根据症状来分辨出患病猫是被什么感染，且临床上双重感染的情况也很常见，因此建立快速、准确的联合检测FHV1和FCV的方法至关重要。

现有技术中的检测试剂盒，对FHV1和FCV的检测采用单通道荧光PCR方法或者荧光PCR所具有的敏感性低、反应时间长。

发明内容

为了克服上述现有技术的缺陷，本发明提供检测猫疱疹病毒和猫杯状病毒的引物探针组合物、试剂盒及其制备方法，并达到以下发明目的：可以同时检测猫疱疹病毒I型和猫杯状病毒，提高检测敏感性，缩短反应时间。

本发明采用的技术方案：

检测猫疱疹病毒和猫杯状病毒的引物探针组合物，所述引物探针组合物包括用于检测猫疱疹病毒I型的引物、用于检测猫杯状病毒的引物、用于监测反应体系内抑制情况的引物、用于检测猫疱疹病毒I型的探针、用于检测猫杯状病毒的探针、用于监测反应体系内抑制情况的探针；

所述用于检测猫疱疹病毒I型的引物具有如SEQ ID NO .1和SEQ ID NO .2所示的核苷酸序列，或具有与SEQ ID NO .1和/或SEQ ID NO .2至少85%同一性的核苷酸序列；所述用于检测猫杯状病毒的引物具有如SEQ ID NO .3和SEQ ID NO .4所示的核苷酸序列，或具有与SEQ ID NO .3和/或SEQ ID NO .4至少85%同一性的核苷酸序列；所述用于监测反应体系内抑制情况的引物，具有如SEQ ID NO .5和SEQ ID NO .6所示的核苷酸序列；

所述用于检测猫疱疹病毒I型的探针具有如SEQ ID NO .7所示的核苷酸序列，或具有与SEQ ID NO .7至少85%同一性的核苷酸序列；所述用于检测猫杯状病毒的探针具有如SEQ ID NO .8所示的核苷酸序列，或具有与SEQ ID NO .8至少85%同一性的核苷酸序列；所述用于监测反应体系内抑制情况的探针具有如SEQ ID NO .9所示的核苷酸序列。

所述用于检测猫疱疹1型病毒的引物、用于检测猫杯状病毒的引物、用于监测反应体系内抑制情况引物的工作浓度均为100-400nmol；所述检测猫疱疹1型病毒的探针、用于检测猫杯状病毒的探针、用于监测反应体系内抑制情况性的探针的工作浓度均为50-200nmol。

所述用于检测猫疱疹病毒I型的探针、用于检测猫杯状病毒的探针的两端均分别连接有荧光报告基团和荧光淬灭基团；所述荧光报告基团为FAM或ROX或VIC；所述荧光淬灭基团为BHQ1或BHQ2。