[发明专利]检测猫疱疹病毒和猫杯状病毒的引物探针组合物、试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.检测猫疱疹病毒和猫杯状病毒的引物探针组合物，其特征在于：所述引物探针组合物包括用于检测猫疱疹病毒I型的引物、用于检测猫杯状病毒的引物、用于监测反应体系内抑制情况的引物、用于检测猫疱疹病毒I型的探针、用于检测猫杯状病毒的探针、用于监测反应体系内抑制情况的探针；

所述用于检测猫疱疹病毒I型的引物具有如SEQ ID NO .1和SEQ ID NO .2所示的核苷酸序列，或具有与SEQ ID NO .1和/或SEQ ID NO .2至少85%同一性的核苷酸序列；所述用于检测猫杯状病毒的引物具有如SEQ ID NO .3和SEQ ID NO .4所示的核苷酸序列，或具有与SEQ ID NO .3和/或SEQ ID NO .4至少85%同一性的核苷酸序列；所述用于监测反应体系内抑制情况的引物，具有如SEQ ID NO .5和SEQ ID NO .6所示的核苷酸序列；

所述用于检测猫疱疹病毒I型的探针具有如SEQ ID NO .7所示的核苷酸序列，或具有与SEQ ID NO .7至少85%同一性的核苷酸序列；所述用于检测猫杯状病毒的探针具有如SEQID NO .8所示的核苷酸序列，或具有与SEQ ID NO .8至少85%同一性的核苷酸序列；所述用于监测反应体系内抑制情况的探针具有如SEQ ID NO .9所示的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的检测猫疱疹病毒和猫杯状病毒的引物探针组合物，其特征在于：所述用于检测猫疱疹病毒I型的探针、用于检测猫杯状病毒的探针的两端均分别连接有荧光报告基团和荧光淬灭基团；所述荧光报告基团为FAM或ROX或VIC；所述荧光淬灭基团为BHQ1或BHQ2。

3.根据权利要求2所述的检测猫疱疹病毒和猫杯状病毒的引物探针组合物，其特征在于：所述用于检测猫疱疹病毒I型的探针：荧光淬灭基团为BHQ1，荧光报告基团为FAM；所述用于检测猫杯状病毒的探针：荧光淬灭基团为BHQ2，荧光报告基团为ROX。

4.检测猫疱疹病毒和猫杯状病毒的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括PCR反应液、阳性对照品、阴性对照品和外标对照品；所述PCR反应液包括具有如SEQ ID NO .1-SEQ IDNO .9所示核苷酸序列的引物探针组合、buffer和酶；所述阳性对照品包括含有猫疱疹病毒I型的质粒、含有猫杯状病毒的质粒，浓度比为1:1；所述阴性对照品为灭菌去离子水；所述外标对照品包含拟南芥SUC2基因的质粒。

5.检测猫疱疹病毒和猫杯状病毒的试剂盒的制备方法，其特征在于：包括设计引物探针、阳性对照品的制备、阴性对照品的制备、外标对照品的制备、荧光定量RT-PCR反应体系的构建；所述设计引物探针：设计如SEQ ID NO .1-SEQ ID NO .9所示核苷酸序列的引物和探针；所述阳性对照品的制备：将猫疱疹病毒I型和猫杯状病毒按照1:1的浓度比例混合制备成阳性质粒混合液，阳性质粒混合液中，含有猫疱疹病毒I型的质粒、含有猫杯状病毒的质粒浓度分别为2×10⁶拷贝/mL。

6.根据权利要求5所述的检测猫疱疹病毒和猫杯状病毒的试剂盒的制备方法，其特征在于：所述外标对照品的制备：将拟南芥SUC2基因连接到质粒载体上，得到质粒溶液。

7.根据权利要求5所述的检测猫疱疹病毒和猫杯状病毒的试剂盒的制备方法，其特征在于：所述荧光定量RT-PCR反应程序的构建：50℃逆转录10min，循环1次；95℃预变性5min，循环1次；94℃变性15s，60℃退火30s，循环40次。