[发明专利]一种hsa-miR-130b过表达的A549稳转细胞株及其构建方法

说明书

本发明涉及医学分子生物学技术领域，具体涉及一种hsa‑miR‑130b过表达的A549稳转细胞株及其构建方法；本发明将miR‑130b基因片段插入pLVX‑‑IRES‑Neo‑EGFP载体，再转入A549细胞株，在细胞中表达miR‑130b，经阳性细胞克隆筛选，A549细胞内源性miR‑130b的表达量提高了5倍，且90％以上的细胞表达绿色荧光蛋白的稳转细胞株，本发明的细胞模型可用于探究hsa‑miR‑130b与肿瘤的相关性及其机理，也可用于从hsa‑miR‑130b表达情况探索人肺癌发生发展的机制。

技术领域

本发明涉及医学分子生物学技术领域，具体涉及一种hsa-miR-130b过表达的A549稳转细胞株及其构建方法。

背景技术

微核糖核酸(miRNAs)是长度为20-25个核苷酸的小型非编码RNA分子。这些分子通过与目标mRNAs的3′-非翻译区(3′-UTR)结合，通过翻译抑制或降解mRNA来调节基因表达^[1]。这些分子有可能调节各种细胞过程，如细胞生长、迁移、入侵、凋亡和血管生成。有研究发现，miR-130家族，包括miR-130b、miR-301a和miR-301b，在膀胱癌标本中高度表达，并通过促进膀胱癌细胞的迁移和侵袭发挥致癌作用^[2]。

近年来，在许多肿瘤中都发现miR-130b高表达，包括弥漫性大B细胞淋巴瘤、结直肠癌、子宫内膜癌、胃癌、肝癌、肺癌等。Tian J等人发现miR-130b靶向PPARγ，并通过VEGF-A/BCL-2途径抑制肺癌细胞凋亡，miR-130b高表达与肺癌患者预后不良有关^[3]。迄今为止，还未有文献报道应用慢病毒转染技术构建人肺腺癌细胞构建稳转细胞株的方法。

肺癌(lung cancer，LC)是最常见的恶性肿瘤之一，也是全球最致命的癌症，约占所有癌症死亡人数的18.4％。而非小细胞肺癌约占LC的85％，且在诊断时大约75％的患者处于中晚期，五年生存率非常低。临床上肺癌治疗多以手术、化疗和放疗为主，近年来虽已取得显著进展，但是仍然存在生存率低和副作用强等缺陷。因此深入研究肺癌发生发展机制和寻找有效治疗方法是目前亟待解决的问题。

参照文献如下：

[1]Ha M,Kim VN.Regulation of microRNA biogenesis.Nature reviewsMolecular cell biology(2014)15(8):509-24.Epub 2014/07/17.doi:10.1038/nrm3838.PubMed PMID:25027649.

[2]Hirono T,Jingushi K,Nagata T,Sato M,Minami K,Aoki M,etal.MicroRNA-130b functions as an oncomiRNA in non-small cell lung cancer bytargeting tissue inhibitor of metalloproteinase-2.Scientific Reports(2019)9(1):6956.Epub 2019/05/08.doi:10.1038/s41598-019-43355-8.PubMed PMID:31061410；PubMed Central PMCID:PMCPMC6502853.

[3]Tian J,Hu L,Li X,Geng J,Dai M,Bai X.MicroRNA-130b promotes lungcancer progression via PPARγ/VEGF-A/BCL-2-medi ated suppression ofapoptosis.Journal of ExperimentalClinical Cancer Research:CR(2016)35.doi:10.1186/s13046-016-0382-3.PubMed PMID:27364335；PubMed Central PMCID:PMCPMC4929777.

发明内容