[发明专利]一种用于人类ApoE/SLCO1B1基因位点的引物、试剂盒及识别方法

说明书

本发明公开了一种用于人类ApoE/SLCO1B1基因位点的引物、试剂盒及识别方法，其中引物包含ApoE基因(c.388TC)位点的野生型引物，ApoE基因(c.526CT)位点的野生型引物，ApoE基因(c.388TC)位点的突变型引物，ApoE基因(c.526CT)位点的突变型引物，通过APOE基因不同位点的扩增引物设计，可以实现对于不同位点的基因属于野生型还是突变型能够准确分类，进一步设计SLCO1B1基因位点的引物，保证了引物能够高效且高质量地识别出不同基因的位点类型，进而能够给出更为准确的基因型数据。

技术领域

本发明涉及体外诊断(IVD)技术领域，具体涉及一种用于人类ApoE/SLCO1B1基因位点的引物、试剂盒及识别方法。

背景技术

他汀类药物是降低低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平从而降低心血管疾病风险的药物。但是，不同个体对他汀类药物的反应不同，他汀类药物在肝脏代谢和转运会因为个体遗传特性而不同，特别是参与他汀类药物肝脏代谢的关键性转运蛋白如有机阴离子转运多肽(OATP1B1)(由SLCO1B1基因编码)以及载脂蛋白E(Apolipoprotein E，ApoE)的基因多态性可影响他汀类药物的血浆及肝脏浓度，从而影响他汀类药物的疗效和安全性。

载脂蛋白E参与血脂的运输、存储和排泄。人ApoE基因位于19号染色体，该基因有两个功能性单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism，SNP)位点c.388TC和c.526CT。这两个位点形成3种单倍体E2、E3、E4。文献报道，ApoE4携带者患冠心病风险要高40％，他汀类药物对ApoE4携带者的疗效往往不佳，而对ApoE2携带者的降脂作用最强。

有机阴离子转运多肽参与多种药物转运，在他汀类药物代谢中负责将血液中的药物转移至肝脏直接发挥药效或者转化为有活性的物质。由12号染色体上的SLCO1B1基因编码。有两个主要的SNP，分别为(c.388AG)和(c.521TC)。这两个SNP位点可形成四种单倍体：SLCO1B1*1a(388A-521T)，SLCO1B1*1b(388G-521T)，SLCO1B1*5(388A-521C)，SLCO1B1*15(388G-521C)。突变型SLCO1B1基因引起编码的OATP1B1转运蛋白活力减弱，表现为肝脏摄取药物能力降低，引起他汀药物血药浓度上升，增加横纹肌溶解症或肌病的发生风险。

目前用于检测基因多态性的方法有很多，如PCR-芯片杂交法、直接测序法、基因芯片法和限制性内切酶酶解片段长度多态性(RFLP)分析法等。

PCR-芯片杂交法：用以同位素或非放射性标记的探针与PCR扩增的目标片断产物杂交，根据阳性斑点判断个体基因型，在此基础上又发展起来一种反向杂交法，即将各种不同的探针固定于同一张膜上，再将PCR产物标记，以PCR产物(待检测基因DNA)反过来与探针杂交。这样一次杂交即可完成多个等位基因分析。此方法具有灵敏度高、特异性强、需样本量少等优点，但不同探针的杂交条件须严格统一(如温度，离子强度)，易出现误差，对某些杂合子分辨率不好，分辨率不及测序技术和PCR荧光探针法。

直接测序法：设计测序引物，提取DNA进行PCR扩增与产物测序。该方法的主要缺点在于：(1)PCR反应前需要对样本进行提取DNA，检测质量与浓度，操作复杂，存在混淆样本的风险。(2)检测多个位点时一个样本需要进行多个反应，检测成本高，对模板量的需求高，操作强度大，并容易造成操作错误和污染。(3)PCR反应后需要对产物进行纯化和测序化学反应等步骤。总体来说就是步骤繁琐，试验周期长，成本高，不利于临床大面积推广。

基因芯片(gene chip)：基因芯片是通过微加工技术，将数以万计甚至百万计的特定序列的基因探针，有规律地排列固定与硅片、玻片等支持物上，构成一个二维DNA探针阵列，利用这类芯片与标记的生物样品进行杂交，可对样品的基因表达谱生物信息进行定性和定量分析。其可进行高通量检测，但该方法费用高，对模板需求量大，操作及数据分析复杂，耗时长。