[发明专利]一种巨噬细胞膜纳米囊泡的制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种巨噬细胞膜纳米囊泡的制备方法与应用，涉及生物医药技术领域。本发明的巨噬细胞膜纳米囊泡，所述巨噬细胞膜过表达PD‑1单链可变片段抗体，并负载腺苷受体拮抗剂。本发明的巨噬细胞膜纳米囊泡通过PD‑1阻断增强T细胞的抗肿瘤活性；本发明的巨噬细胞膜纳米囊泡负载了A_2a腺苷受体(A_2aR)拮抗剂CPI‑444，可协助T细胞拮抗腺苷，增加肿瘤浸润T细胞的密度和活性，直接抑制肿瘤进展和转移，为当前的联合PD‑1抗体疗法提供了新的思路。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种巨噬细胞膜纳米囊泡的制备方法与应用。

背景技术

恶性肿瘤是威胁人类生命与健康的最主要疾病之一，对我国人民生命和健康造成了严重威胁。肿瘤的传统治疗方法主要包括手术切除、放疗和化疗等，但这些治疗方法都具有一定的局限性，比如手术治疗无法解决非实体瘤，放疗和化疗具有极大副作用且易复发。近年来，癌症免疫疗法取得了令人瞩目的临床效果，并在2013年被《科学》杂志评为年度最重要的科学突破。癌症免疫治疗是一种通过激活人体内源的免疫系统来杀伤肿瘤细胞的治疗方式。目前肿瘤免疫治疗的研究主要集中于免疫检查点(Checkpoint)阻断剂疗法，肿瘤疫苗，过继性细胞疗法，并在临床上取得了显著的治疗效果。然而，这些免疫疗法都存在其一定的局限性：PD-1单抗药物在临床治疗中的总体响应率低于30％，肿瘤疫苗目前还处于临床研究，而嵌合抗原受体T细胞免疫疗法(CAR-T)细胞疗法仅在血液肿瘤中有较好的疗效。

T细胞在激活后表达PD-1受体，作为一种刹车来限制自身免疫攻击。肿瘤细胞巧妙地利用这种负调控机制，通过表达程序性死亡配体1(programmed death ligand 1,PD-L1)来逃避免疫监视，从而使T细胞衰竭，从而避免免疫消除。因此，免疫检查点阻断疗法(ICB)，一种用Nivolumab和Pembrolizumab等单克隆抗体阻断PD-1/PD-L1轴的策略，在各种类型的癌症中获得了前所未有的应答。但ICB治疗仍有一定的局限性，如临床应答率有限、治疗效果短暂、自身免疫攻击等。这些问题与免疫抑制肿瘤微环境(TME)有所关联。M2巨噬细胞和调节性T细胞(Tregs)等免疫抑制细胞总是被招募到肿瘤组织中，从而抑制T细胞活性。此外，外周核苷酸酶(CD39和CD73)在肿瘤细胞中的高表达导致了TME中腺苷的积累。腺苷与A_2a腺苷受体(A_2aR)结合，降低T细胞的抗肿瘤活性，促进调节性T细胞(Treg)的极化，进一步限制ICB治疗的疗效。此外，PD-1抗体在临床治疗中可引起多种自身免疫攻击，包括心肌炎、甲状腺炎、1型糖尿病、结肠炎等，甚至危及患者的生命。因此，迫切需要提高应答率，同时减少免疫检查点抗体的毒性作用。除了单克隆抗体，小分子化合物药物也被开发来调节免疫细胞的活性。值得注意的是，化学药物靶向给药不仅能提高药物疗效，而且能降低毒副作用，包括外泌体在内的天然细胞膜泡被认为是药物输送的潜在载体。外泌体表现出良好的生物相容性、优异的载药能力和循环稳定性。然而，外泌体的产量太低，无法满足研究和临床治疗的需要。因此，采用挤压和超声方法制备了人工细胞膜纳米囊泡(NVs)。此外，与外泌体相比，细胞膜NVs的数量和大小更可控。特别是，NVs可以通过基因工程表达功能性蛋白，实现对癌症治疗的特异功能，因为这些NVs中的重组蛋白可以保持其完整的生物活性。此外，NVs可以靶向并浸润到特定的肿瘤中，从而促进其发挥作用。基于目前的免疫疗法存在的局限性，开发新型癌症免疫疗法有着迫切的临床需求。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种巨噬细胞膜纳米囊泡的制备方法与应用。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种巨噬细胞膜纳米囊泡，所述巨噬细胞膜过表达PD-1单链可变片段抗体，并负载腺苷受体拮抗剂。