[发明专利]一种巨噬细胞膜纳米囊泡的制备方法与应用有效
| 申请号： | 202210460518.8 | 申请日： | 2022-04-28 |
| 公开（公告）号： | CN114748448B | 公开（公告）日： | 2023-10-24 |
| 发明（设计）人： | 张旭东;梁欣;薛添元;孟繁蔷 | 申请（专利权）人： | 中山大学·深圳;中山大学 |
| 主分类号： | A61K9/51 | 分类号： | A61K9/51;A61K47/46;A61K31/519;A61K39/395;C12N5/0786;C12N5/10;C07K16/28;C12N15/13;C12N15/867;A61P35/00;A61P35/04;C12R1/91 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 许羽冬 |
| 地址： | 518000 广东省深圳市*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 巨噬细胞 纳米 制备 方法 应用 | ||
1.一种巨噬细胞膜纳米囊泡，其特征在于，所述巨噬细胞膜过表达PD-1单链可变片段抗体，并负载腺苷受体拮抗剂。
2.根据权利要求1所述的巨噬细胞膜纳米囊泡，其特征在于，所述巨噬细胞为RAW264.7细胞系。
3.根据权利要求1所述的巨噬细胞膜纳米囊泡，其特征在于，所述腺苷受体拮抗剂为A2a腺苷受体拮抗剂。
4.根据权利要求3所述的巨噬细胞膜纳米囊泡，其特征在于，所述A2a腺苷受体拮抗剂为CPI-444。
5.根据权利要求3所述的巨噬细胞膜纳米囊泡，其特征在于，所述CPI-444的载药率为15.2％。
6.根据权利要求1～5任一项所述的巨噬细胞膜纳米囊泡的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)构建和扩增PD-1单链可变片段抗体慢病毒载体质粒；
(2)使用步骤(1)的质粒进行慢病毒包装，得PD-1单链抗体病毒；
(3)构建稳定过表达PD-1单链可变片段抗体的巨噬细胞；
(4)扩增培养步骤(3)的巨噬细胞，离心收集细胞，用含蛋白酶抑制剂的PBS溶液重悬细胞，经过滤得过表达PD-1单链可变片段抗体的巨噬细胞膜纳米囊泡；
(5)将腺苷受体拮抗剂负载到过表达PD-1单链可变片段抗体的巨噬细胞膜纳米囊泡，得所述巨噬细胞膜纳米囊泡。
7.根据权利要求1～5任一项所述的巨噬细胞膜纳米囊泡在制备免疫检查点抑制剂中的应用。
8.根据权利要求1～5任一项所述的巨噬细胞膜纳米囊泡在制备靶向肿瘤细胞治疗药物中的应用。
9.根据权利要求8所述应用，其特征在于，所述肿瘤细胞为黑色素瘤细胞。
10.根据权利要求8所述应用，其特征在于，所述巨噬细胞膜纳米囊泡的浓度为25mg/kg体重。
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