[发明专利]一种干细胞在制备人工皮肤中的用途

说明书

本发明涉及一种干细胞在制备人工皮肤中的用途。本发明提供了一种抑制Wnt/β‑catenin信号通路的单克隆抗体并将其用于制备抑制骨髓间充质干细胞衰老的药物组合物，同时采用所述单抗培养的骨髓间充质干细胞制备人工皮肤后具有较好的促进伤口愈合的效果。具有较好的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物、美容领域，更具体的涉及一种改进的人工皮肤的制备方法及应用。

背景技术

人工皮肤是指利用工程学和细胞生物学的原理和方法，在体外人工研制的皮肤代用品，用来修复、替代缺损的皮肤组织。最近10多年来，组织工程的迅猛发展，使得研究开发具有良好生物相容性的、在植入体内后可以自行生物降解的、可用于器官和软、硬组织的重建与修复的组织工程材料成为可能。组织工程的第一个面市产品是人工皮肤，也是迄今为止在临床应用方面最为成功的组织工程材料。且已在烧伤、慢性静脉溃疡以及先天性皮肤畸形等疾病的治疗方面取得良好效果。近些年来，人工皮肤的研究开发十分活跃，新的人工皮肤产品不断涌现。有人曾把人工皮肤分为表皮替代物、真皮替代物和全皮替代物三类，然而，根据人工皮肤的发展，也有研究者以为，已有的人工皮肤可以根据其性能分为普通型人工皮肤和组织工程化人工皮肤；也可根据其与损伤皮肤的结合方式分为暂时替代性人工皮肤和永久替代性人工皮肤。

组织工程皮肤的制备方法较多。传统的动物或人体二倍体非转化细胞的培养一般是单层贴壁培养，它不能反映正常的细胞生长环境，而组织工程的核心技术便是细胞的三维立体培养技术，这种培养可以使细胞进一步发展为与其在体内相对应的组织结构相似的人造组织。由于异体移植物会被受者免疫系统视为外源物质而排斥，但培养的皮肤在临床中未观察到排斥效应，这可能是由于组织工程皮肤中没有加工和递呈抗原的朗格罕氏细胞，因而免疫原性弱。此外，在慢性伤口治疗中，人造生物皮肤可刺激休眠的溃疡边缘向伤口中心迁移，从而修复伤口。事实上，这些人工培养的移植物并不存活，只是暂时性替代皮肤功能，并且分泌皮肤愈合所需的细胞因子和皮肤基质蛋白，为自体细胞的生长、血管的生成提供良好的生长环境和结构支架，最终所有的细胞会被自体细胞所替代，这种替代过程一般在人造生物皮肤移植后一周便会发生。

CN110960730B中公开了一种3D打印的仿生抗排异人工皮肤及其制备方法。该方法是将带氨基的多糖类物质和蛋白质溶于酸性溶液中得到前体溶液，亚精胺和小分子二醛或两端用醛基修饰的高分子材料溶于无水乙醇中得到亚精胺交联剂，采用3D生物打印方法，在培养皿中打印前体溶液并雾化亚精胺交联剂，依次进行，并通过控制各层的亚精胺交联剂的浓度从而控制各层的硬度，最终得到硬度具有梯度变化的仿生抗排异人工皮肤。CN1212160C公开了一种含有人骨髓间充质干细胞的人工皮肤及其构建方法，它是以胎牛皮或牛跟腱为基料，经过两次酶处理的胶原海绵膜，再与肝素和表皮生长因子的混合物构建含有表皮生长因子的皮肤组织工程支架，将从人骨髓血中纯化的人骨髓间充质干细胞植入支架两侧，构建支架两侧和内部均有骨髓间充质干细胞的人工皮肤。但是所述方法在应用上由于骨髓间充质干细胞本身易衰老而导致还有改进的空间。

在过去二十年，最先面市的组织工程产品———人造生物皮肤的开发取得了很大进展，已有几种产品获得FDA批准，成功地用于治疗重度皮肤烧伤、慢性顽固性皮肤溃疡等，人造生物皮肤不仅能够促进皮肤愈合，而且没有免疫原性，具有来源充足、使用方便安全等优点。尽管如此，人造生物皮肤产品还有待完善，还有待深入研究。

发明内容

本发明克服现有技术的缺陷，克服骨髓间充质干细胞容易衰老的缺陷，提供一种高活性、高增殖特性的骨髓间充质干细胞，进而制备相应的人工皮肤。

现有技术的研究表明激活的Wnt/β-catenin信号通路可导致MSCs衰老，抑制Wnt/β-catenin信号通路可以延缓细胞衰老，提高细胞增殖和存活能力。发明人在此基础上开发了新的抑制Wnt/β-catenin信号通路的单克隆抗体。

一方面，本发明提供一种抑制Wnt/β-catenin信号通路的单克隆抗体，本发明获得的1A2单克隆抗体具有较好的结合效果，其解离常数达到了(15.63±0.13)nM。