[发明专利]突变型水杨酸脱羧酶、菌种及其在银杏酸降解中的应用

说明书

本发明公开了一种高效降解银杏酸的突变型水杨酸脱羧酶，为突变酶Sdc‑P191A和/或突变酶Sdc‑Y64；突变酶Sdc‑P191A是氨基酸序列为SEQIDNO.1的水杨酸脱羧酶sdc的第191位氨基酸由脯氨酸改变为丙氨酸，突变酶Sdc‑P191A的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示；突变酶Sdc‑Y64T氨基酸序列为SEQIDNO.1的水杨酸脱羧酶sdc的第64位氨基酸由酪氨酸改变为苏氨酸，突变酶Sdc‑Y64T的氨基酸序列如SEQIDNO.3所示。本发明选择部分氨基酸进行定点突变，并成功构建得到两种突变型水杨酸脱羧酶，得到了两株相较于野生型sdc高效降解银杏酸的突变酶。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，尤其是一种突变型水杨酸脱羧酶Sdc-P191A和Sdc-Y64T在银杏酸降解中的应用。

背景技术

白果既是一种中药，其中含有多种活性成分，通常用来止咳、润肺、祛痰、治带浊和缩小便等，还用于肺结核等的治疗；又是一种保健食品，可以养生，曾被推崇为皇家贡品，深受人们喜爱。

在现代的研究中发现，白果中含有较多的亚油酸，它对高血脂和高血压都有一定的改善作用，而且可以防止心血管疾病，同时还可以在一定程度上毒杀癌细胞的培养物；有研究发现白果中维生素E的存在可以加强人体抗氧化和清除自由基的能力，同时也对细胞膜有一定的保护作用，还可以延长红细胞的存活时间；也有研究证明白果中的β-胡萝卜素对脂质有极强的抗氧化性，同时还可以起到预防癌症、心血管疾病和白内障的作用；而白果蛋白的存在，使白果具有以下特性：(1)抗氧化、抗衰老；(2)增加体内的血清溶血素；(3)提高人体抗辐射损伤的功能、造血功能和体内免疫功能；(4)对羟基自由基和超氧阴离子等的体外活性氧有较强的清除功能；(5)对DNA损伤有一定的保护作用。尽管白果有很强的医用和食用价值，并且不断有研究人员对其进行研究，但白果的利用率依然很低，这是由于其中有毒成分——银杏酸得不到很好的处理，因而严重限制了白果的开发和利用。因此，去除白果中的有毒物质银杏酸成为当今研究中的一大热点。

有关银杏酸的提取测定方法的报道已有很多，脱羧降解银杏酸是其中一种重要手段，且已有生物研究方法表明来自丝孢酵母的水杨酸脱羧酶(Sdc)对银杏酸具有脱羧降解功能，可使银杏酸脱羧为无毒产物，但之前的研究表明野生型水杨酸脱羧酶降解银杏酸的性能较低。因此，本发明选取部分突变位点，利用定点突变技术对水杨酸脱羧酶进行定向改造，以研究能够高效降解银杏酸的新型菌株。这对于我国特有银杏资源的开发利用、银杏产品的安全生产以及降低生产成本等都具有重要意义。

通过检索，发现如下一篇与本发明专利申请相关的专利公开文献：

1、一种水杨酸脱羧酶降解银杏酸的应用(CN104770624A)，所述酶的基因序列如序列1所述，该酶为水杨酸脱羧酶(Sdc)，含有Sdc的pET21a(+)-sdc/E.coli-BL21(DE3)的细胞破碎液可明显降低银杏酸的含量，本发明的酶可以在较广的温度和pH范围内发挥对银杏酸的降解作用，为银杏中取出银杏酸提供更加快捷便利的方法，为银杏的广泛利用提供更多可能性。

通过对比，上述公开文献为野生型Sdc对银杏酸的降解，但其降解能力相对较低，本发明以PCR技术为基础，选择部分位点对野生型Sdc进行突变改造，获得两株相较于野生型Sdc具有高降解银杏酸能力的突变菌株。因此，本发明专利申请与上述专利公开文献存在本质的不同。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种突变型水杨酸脱羧酶Sdc-P191A和Sdc-Y64T在银杏酸降解中的应用。

本发明解决技术问题所采用的技术方案是：

一种高效降解银杏酸的突变型水杨酸脱羧酶，所述突变型水杨酸脱羧酶为突变酶Sdc-P191A和/或突变酶Sdc-Y64；