[发明专利]突变型水杨酸脱羧酶、菌种及其在银杏酸降解中的应用在审
| 申请号： | 202210444588.4 | 申请日： | 2022-04-26 |
| 公开（公告）号： | CN114645039A | 公开（公告）日： | 2022-06-21 |
| 发明（设计）人： | 戴玉杰;宋园园;胡彦营;贺傲;孙国娟;李嘉欣;孟璇;景文杰;贾士儒 | 申请（专利权）人： | 天津科技大学 |
| 主分类号： | C12N9/88 | 分类号： | C12N9/88;C12N15/60;C12N15/70;C12N1/21;A61K36/16;C12R1/19 |
| 代理公司： | 天津盛理知识产权代理有限公司 12209 | 代理人： | 韩晓梅 |
| 地址： | 300457 天津市滨*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 突变型 水杨酸 脱羧酶 菌种 及其 银杏 降解 中的 应用 | ||
1.一种高效降解银杏酸的突变型水杨酸脱羧酶，其特征在于：所述突变型水杨酸脱羧酶为突变酶Sdc-P191A和/或突变酶Sdc-Y64；
所述突变酶Sdc-P191A是氨基酸序列为SEQ ID NO.1的水杨酸脱羧酶sdc的第191位氨基酸由脯氨酸改变为丙氨酸，所述突变酶Sdc-P191A的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述突变酶Sdc-Y64T氨基酸序列为SEQ ID NO.1的水杨酸脱羧酶sdc的第64位氨基酸由酪氨酸改变为苏氨酸，所述突变酶Sdc-Y64T的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
2.根据权利要求1所述的高效降解银杏酸的突变型水杨酸脱羧酶，其特征在于：所述突变酶Sdc-P191A最适作用pH为5.5，最适作用温度为50℃，且4h后仍具有降解银杏酸的活性，与野生型sdc相比其温度稳定性稍有提高，且与未突变的野生型sdc相比，其银杏酸的降解能力提高了116.74％。
3.根据权利要求1或2所述的高效降解银杏酸的突变型水杨酸脱羧酶，其特征在于：所述突变酶Sdc-Y64T最适作用pH为5.5，最适作用温度为40℃，比野生型sdc最适作用温度降低了10℃，在40℃下能够在1-4h内保持降解银杏酸的能力；且与未突变的野生型sdc相比，其银杏酸的降解能力提高了105.18％。
4.编码如权利要求1至3任一项所述的高效降解银杏酸的突变型水杨酸脱羧酶的基因，其特征在于：所述突变酶Sdc-P191A基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述突变酶Sdc-Y64T基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。
5.用于在宿主细胞内表达如权利要求1至3任一项所述的突变型水杨酸脱羧酶的重组质粒，其特征在于：所述重组质粒为适于在大肠杆菌中表达的载体。
6.根据权利要求5所述的重组质粒，其特征在于：所述重组质粒为含有SEQ ID NO.4和/或SEQ ID NO.5的基因。
7.一种包括如权利要求5或6所述的重组质粒的突变工程菌株。
8.根据权利要求7所述的突变工程菌株，其特征在于：所述突变工程菌株是以大肠杆菌E.coliBL21(DE3)为宿主菌，将对应的重组质粒转化到宿主菌后得到的重组菌。
9.如权利要求1至3任一项所述的突变型水杨酸脱羧酶在高效降解银杏酸中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述银杏酸是指一类2-羟基-6-烷基苯甲酸类化合物，具体为银杏酸R＝C13:0、银杏酸R＝C15:0、银杏酸R＝C15:1、银杏酸R＝C17:1、银杏酸R＝C17:2。
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