[发明专利]研究蓝萼庚素对非酒精性脂肪肝的治疗作用和机制的方法

说明书

本发明公开了研究蓝萼庚素对非酒精性脂肪肝的治疗作用和机制的方法，包括以下步骤：将小鼠随机分成对照组和高脂组；将高脂组进一步分为生理盐水组、蓝萼庚素低剂量和蓝萼庚素高剂量组，每组6只；建立非酒精性脂肪性肝炎模型，同时利用蓝萼庚素进行灌胃。本发明通过从传统治疗肝炎的草药香茶菜中分离获得高活性成分蓝萼庚素，并通过建立NASH小鼠模型，研究蓝萼庚素对NASH导致的氧化应激及一系列炎症因子的上调的影响，并通过hepa1‑6细胞系进一步说明，同时阐述其通过抑制NF‑κB通路的上游基因NIK的表达发挥抑制非酒精性脂肪性肝炎的作用，从而能够为非酒精性脂肪性肝炎的药物治疗寻找新的靶点。

技术领域

本发明属于非酒精性脂肪肝治疗技术领域，具体为研究蓝萼庚素对非酒 精性脂肪肝的治疗作用和机制的方法。

背景技术

现有生活中，非酒精性脂肪性肝炎是非酒精性脂肪肝的侵蚀性形式，是 非酒精性脂肪肝病发展到严重阶段的临床病理综合征。在肝脏脂肪变性的基 础上表现为炎症和纤维化病理特征，如果不加干预可发展为肝硬化和肝细胞 癌。治疗上除了体育锻炼和节食以外，尚无针对性有效治疗NASH的临床药物，寻找和开发缓解非酒精性脂肪性肝炎的特效药物具有重大社会意义。

发明内容：

本发明的目的就在于为了解决上述问题而提供研究蓝萼庚素对非酒精性 脂肪肝的治疗作用和机制的方法，解决了背景技术中提到的问题。

为了解决上述问题，本发明提供了一种技术方案：

研究蓝萼庚素对非酒精性脂肪肝的治疗作用和机制的方法，包括以下步 骤：

S1、将小鼠随机分成对照组和高脂组；

S2、将高脂组进一步分为生理盐水组、蓝萼庚素低剂量和蓝萼庚素高剂 量组，每组6只；

S3、建立非酒精性脂肪性肝炎模型，同时利用蓝萼庚素进行灌胃；

S4、灌胃后检测血清中的肝损指标，同时解剖肝脏，用于HE染色、qPCR 和免疫印迹检；

S5、培养肝癌细胞系Hepa1-6，同时给予TNFα/棕榈酸/H₂O₂模拟非酒精 性脂肪性肝炎内环境，并分为六组；

S6、设立一组为对照组，其余分别加入蓝萼庚素，并检测其荧光强度；

S7、将NIK和p100表达质粒共转Hepa1-6细胞，并加入蓝萼庚素，同时 免疫印迹检测NIK、p100、p52蛋白水平。

作为优选，所述步骤S1中的小鼠选用7周龄C57小鼠。

作为优选，所述步骤S1中高脂组中的小鼠均为通过CDAHFD饲料进行喂 食的小鼠。

作为优选，所述步骤S2中蓝萼庚素低剂量组的规格为10mg/kg，所述步 骤S2中蓝萼庚素高剂量组的规格为50mg/kg。

作为优选，所述步骤S3中建立非酒精性脂肪性肝炎模型的时间为进行高 脂组喂养8周后。

作为优选，所述步骤S3中利用蓝萼庚素进行灌胃的时间为4周。

作为优选，所述步骤S5中给予TNFα/棕榈酸/H₂O₂中TNFα、棕榈酸和H₂O₂的规格分别为10ng/ml、100uM和1uM。

作为优选，所述步骤S6中加入蓝萼庚素的量分别为0.5μM、1μM、2μM、 5μM和10uM。

作为优选，所述步骤S7中加入蓝萼庚素的量为1μM和5uM。