[发明专利]一种脱细胞瘢痕皮肤支架材料及其制备方法与应用

说明书

本发明属于医学领域，公开了一种脱细胞瘢痕皮肤支架材料及其制备方法与应用，所述脱细胞瘢痕皮肤支架材料的制备方法，包括如下步骤：步骤1：切除瘢痕标本中表皮及皮下组织，将获得的组织切成的薄片，再将薄片中的病毒进行灭活；步骤2:将步骤1处理后的薄片中细胞进行溶解；步骤3：将步骤2处理后的薄片储存于抗生素溶液中，并置于低温条件下备用，即完成脱细胞瘢痕皮肤支架材料的制备。其制备成本低，且可以实现离体瘢痕皮肤资源的合理利用，抗原性弱，且降解速度慢，使用寿命长，营养渗透性好、血管化速度快且血管化程度高，皮片成活率高。

技术领域

本发明属于医学领域，尤其涉及一种脱细胞瘢痕皮肤支架材料及其制备方法与应用。

背景技术

真皮支架材料(ADM)为宿主细胞提供了三维的生长附着环境，是组织进行修复重建的关键因素。自ADM作为真皮支架材料被报道于应用于创面修复以来，ADM是皮肤重建中理想的支架材料。ADM可以作为体外支持系统调节成纤维细胞的增殖分化，同时下调其细胞外基质成分的分泌，包括胶原蛋白的过度表达，减轻创面瘢痕的产生。然而，当前市面上使用的真皮支架材料的缺点包括费用昂贵，血管化程度有限，抗原性强，来源有限及材料降解过快，营养渗透性差、血管化速度慢、皮片成活率低等，限制了临床广泛应用。我们发现，具有大面积瘢痕的患者通常会经历几次瘢痕切除术，因此能否使用上一次瘢痕切除后制备的皮肤材料来进行下一次瘢痕切除后的创面修复，从而克服当前市面上皮肤支架材料的缺点，是我们进行本专利申请的立足点。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明的目的之一在于提供一种成本低，且抗原性弱，且实现资源合理利用的脱细胞瘢痕皮肤支架材料的制备方法。

为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：一种脱细胞瘢痕皮肤支架材料的制备方法，包括如下步骤：

步骤1：切除瘢痕标本中表皮及皮下组织，将获得的组织切成的薄片，再将薄片中的病毒进行灭活；

步骤2:将步骤1处理后的薄片中细胞进行溶解；

步骤3：将步骤2处理后的薄片储存于抗生素溶液中，并置于低温条件下备用，即完成脱细胞瘢痕皮肤支架材料的制备。

上述技术方案中所述步骤1中薄片病毒灭活方式是：将薄片置于消毒液中浸泡1.5-2.5h，然后将薄片取出后洗除残留的消毒液即可。

上述技术方案中所述消毒液为过氧乙酸和乙醇混合的水溶液，其中，所述消毒液中过氧乙酸的浓度为1vol％，所述消毒液中乙醇的浓度为24vol％。

上述技术方案中所述薄片洗除残留消毒液的方式是：先将薄片置于无菌的PBS缓冲液或无菌的生理盐水中浸泡20-40min,中途更换1-3次浸泡液，然后再将薄片置于纯水中清洗1-3次，每次清洗时长为5-15min。

上述技术方案中所述步骤2中薄片中细胞溶解的方式是：将薄片先置于细胞膜消解液中浸泡2h并持续振荡，再将薄片取出再置于细胞核消解液中，并在37℃下持续振荡72小时，期间每间隔24小时更换一次细胞核消解液，最后将薄片取出后洗除残留的细胞核消解液即可。

上述技术方案中所述细胞膜消解液为胰蛋白酶和EDTA-Na₂混合的水溶液，所述细胞膜消解液中的胰蛋白酶浓度为2.5g/L，所述细胞膜消解液中的EDTA-Na₂的浓度为0.5mmol/L。

上述技术方案中所述细胞核消解液为浓度为1vol％的Triton X-100溶液。

上述技术方案中所述薄片洗除残留细胞核消解液的方式是：先将薄片置于无菌的PBS缓冲液或无菌的生理盐水中浸泡20-40min,中途更换1-3次浸泡液，然后再将薄片置于纯水中清洗1-3次，每次清洗时长为5-15min。

本发明的目的之二在于提供一种采用如上所述制备方法所制得的脱细胞瘢痕皮肤支架材料。