[发明专利]一株高产monacolin k的重组红曲菌及其构建方法与应用

权利要求书

1.一株高产monacolin k的重组红曲菌，其特征在于，该重组红曲菌命名为：红曲菌BZ1，分类名称为：Monascus ruber，由红曲菌AS3.549基因敲除桔霉素合成基因pksCT后获得。

2.一株高产monacolin k的重组红曲菌，其特征在于，该重组红曲菌命名为：红曲菌BZ2，分类名称为：Monascus ruber，由红曲菌AS3.549基因敲除桔霉素合成基因pksCT和红曲色素合成基因MpigF后获得。

3.一株高产monacolin k的重组红曲菌，其特征在于，该重组红曲菌命名为：红色红曲菌浙工红曲4号，分类名称为：Monascus ruber，由红曲菌AS3.549基因敲除桔霉素合成基因pksCT和红曲色素合成基因MpigH和MpigF，并去除外源基因后获得。

4.一种构建权利要求3所述高产moancolin k重组红曲菌的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

（1）以红曲菌AS3.549基因组为模板，扩增出pksCT基因的UTL1核酸片段和UTR1核酸片段；MpigF基因的UTL2核酸片段和UTR2核酸片段；MpigH基因的UTL3核酸片段和UTR3核酸片段；

（2）以根瘤农杆菌载体pPZP201为母核，与核酸替代片段LY3连接得到pLY3双元载体，构建载体pLY3::∆pksCT、pLY3::∆MpigF、pLY3::∆MpigH；所述核酸替代片段LY3依次包括以下序列：左LoxP序列、5U启动子、Cre酶序列、NOS终止子、hph序列和右LoxP序列；

（3）获得pksCT基因、MpigH基因和MpigF基因缺失且不含外源基因的红曲菌浙工红曲4号。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述核酸替代片段LY3序列如SEQ ID NO.7所示。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述UTL1核酸片段序列如SEQ ID NO.1所示，所述UTR1核酸片段序列如SEQ ID NO.2所示。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述UTL2核酸片段序列如SEQ ID NO.3所示，所述UTR2核酸片段序列如SEQ ID NO.4所示。

8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述UTL3核酸片段序列如SEQ ID NO.5所示，所述UTR3核酸片段序列如SEQ ID NO.6所示。