[发明专利]一种利他林人工半抗原、人工抗原及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种利他林人工半抗原、人工抗原及其制备方法和应用。利他林人工半抗原的分子结构式如式（Ⅰ），利他林人工抗原的分子结构式如式（Ⅱ）。所述应用是所述利他林人工抗原在制备抗利他林抗体中的应用。本发明的利他林人工半抗原最大程度地保留了利他林的特征结构，且具有可以与载体蛋白发生偶联的活性基团，可作为抗原决定簇；进一步制备获得的利他林人工抗原可免疫获得亲和力高、灵敏度高、特异性强的抗利他林抗体，经免疫新西兰白兔获得的多克隆抗体，可用于对利他林进行快速、准确的免疫检测和免疫分析。

技术领域

本发明属于生物化工技术领域，具体涉及一种利他林人工半抗原、人工抗原及其制备方法和应用。

背景技术

利他林是一种中枢大脑的兴奋剂，可增进脑部的兴奋、清醒和降低身体疲劳的感觉，使病人的脑部随时保持清醒的状态。此药可用来治疗成年人的昏睡症。此药用于小孩主要是治疗过动儿或注意力不集中人群，亦可用来治疗轻微到中度的沮丧。

利他林最常见的副作用为:体重下降(9%)、食欲减少(26%)，恶心(12%)，呕吐(10%)、头痛(13%)，失眠(13%)，较严重的副作用为:心跳突然地加快或增强、幻觉、皮肤发红、身体出现不正常青紫色的瘀伤、性情改变、胸口痛、喉咙酸痛、想睡觉、关节痛、癫痫发作等等。

目前，对利他灵的检测主要依靠红外光谱（IR）、气相色谱-质谱联用法（GC-MS)、液相色谱四级杆飞行时间质谱仪（Q-TOF LC/MS）、核磁共振氢谱（H NMR）、核磁共振碳谱（13CNMR）、核磁共振氟谱（19F NMR）等方法，存在仪器昂贵，检测费时，并且需要专业技术人员进行操作，不能达到现代检测对快速、准确的要求。

免疫分析法可以弥补以上所有缺点，免疫分析法是一种利用抗原抗体特异性结合反应检测各种物质（药物、激素、蛋白质、微生物等）的分析方法，建立小分子化合物的免疫分析方法的关键是能够制造出对小分子化合物具有高亲和力和高特异性的抗体。但是，由于包括利他林在内的大多数小分子化合物（分子量小于1000），不具有免疫原性，即缺乏T细胞表位而无法直接诱导动物机体产生特异性抗体，故小分子物质被称为半抗原。通过适当的化学修饰，在半抗原分子结构的某个位置上带上端部为活性基团的连接臂，再与大分子载体结合，生成半抗原-载体偶联物（即人工抗原），人工抗原可以借助T细胞表位来间接诱导B细胞的增殖和分化，继而产生特异性抗体。

现有技术中还未有利他林人工半抗原、人工抗原的相关报道。

发明内容

本发明是为了克服现有技术中的对于对利他灵的检测存在仪器昂贵，检测费时，并且需要专业技术人员进行操作，不能达到现代检测对快速、准确的要求的缺陷，提供了一种利他林人工半抗原、人工抗原及其制备方法和应用以克服上述缺陷。

为实现上述发明目的，本发明通过以下技术方案实现：

本发明的第一个目的在于提供了一种利他林人工半抗原，其分子结构式如（Ⅰ）所示：

（Ⅰ）。

本发明中的利他林人工半抗原其通过将利他林的特征结构进行修饰，在远离其主要活性基团的端位上引入了新的活性基团，这样既可以最大限度的保留其特征结构，又提供了可以与载体蛋白偶联的活性位点，可作为抗原决定簇。

本发明的第二个目的在于提供了如上所述利他林人工半抗原的制备方法，包括以下步骤：

（1）将利他林与碱溶液反应，发生水解反应，然后调节pH至酸性，经萃、干燥、浓缩后得白色粉末状产物A；

（2）将白色粉末状产物A、甘氨酸乙酯盐酸盐以及1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐混合，搅拌反应，反应产物经萃取、干燥、浓缩后得红棕色油状产物B；

（3）将产物B与碱溶液反应，发生水解反应，然后调节pH至酸性，经萃、干燥、浓缩后得利他林半抗原Ⅰ。