[发明专利]用于双通道FRET成像的相机安装装置及其校正方法

权利要求书

1.用于双通道FRET成像的相机安装装置的校正方法，采用用于双通道FRET成像的相机安装装置，其特征在于：用于双通道FRET成像的相机安装装置包括分光模块、透射光成像相机支架和反射光成像相机四轴可调支架和校正软件；

分光模块用于将入射光分离为相互垂直的透射光和反射光，分光模块包括滤光片组立方体滤光片组立方体上设有透射光通光孔、反射光通光孔和入射光通光孔，透射光成像相机支架和反射光成像相机四轴可调支架分别连接分光模块，透射光通光孔的开口朝向透射光成像相机支架，反射光通光孔的开口朝向反射光成像相机四轴可调支架，入射光通光孔上连接有第一透镜套筒；

透射光成像相机支架和反射光成像相机四轴可调支架分别用于安装透射光成像相机和反射光成像相机，第一透镜套筒用于连接荧光显微镜；

反射光成像相机四轴可调支架包括伸缩套筒和具有xy方向位移和360度旋转功能的调整架，调整架用于调节反射光成像相机在x、y方向和旋转角度上的偏差，校正软件用于对透射光成像相机和反射光成像相机的图像进行处理，从而进行两个成像通道的校正；

该方法包括如下步骤：

S1，将用于双通道定量FRET成像的相机安装装置连接到荧光显微镜的成像相机安装接口处；

S2，调整透射光成像相机支架的总长度并固定透射光成像相机；

S3，调整透射光成像相机和反射光成像相机的焦面；

S4，调整反射光成像相机的角度；

S5，调整反射光成像相机在x、y方向上的位置；

步骤S4包括如下步骤：

C1，移动荧光显微镜的载物台，使透射光成像相机的预览视野中出现标尺图像并使标尺图像位于视野中央区域，然后在标尺图像中选取特征点和特征线，采集透射光成像相机的图像并将图像导入校正软件中；

C2，保持载物台不动，在反射光成像相机的预览视野中对当前视野成像，并将当前反射光成像相机的图像导入校正软件中；

C3，通过校正软件对透射光成像相机的图像和反射光成像相机的图像分别进行自动对比度处理，然后分别选择不同的伪彩色，进行上伪彩处理，再将两个图像进行图像融合；

C4，对反射光成像相机的图像进行旋转角度调整，直至观察到两个图像的特征线平行；

C5，对反射光成像相机的图像进行x方向和y方向的平移，直至两个图像的特征点重合，再微调反射光成像相机的图像的旋转角度，直至两个图像的特征线平行；

C6，根据步骤C4和步骤C5中调整的旋转角度，调节调整架，使反射光成像相机旋转相应角度；

C7，重复步骤C2-C3，当只需要对反射光成像相机的图像进行x方向和y方向的平移便可使两个图像的特征线完全重合时，旋转角度误差校正完成；

步骤S5包括如下步骤：

D1，移动载物台，使透射光成像相机的预览视野中的标尺图像的特征点与视野的右上角顶点重合，采集当前透射光成像相机的图像，并将图像导入校正软件中；

D2，通过调整架调整反射光成像相机在x、y方向的位置，直至反射光成像相机的预览视野中的标尺图像的特征点与视野的右上角顶点重合，采集当前反射光成像相机的图像，并将图像导入校正软件中；

D3，通过校正软件对透射光成像相机的图像和反射光成像相机的图像分别进行自动对比度处理，然后分别选择不同的伪彩色，进行上伪彩处理，再将两个图像进行图像融合；

D4，观察两个图像是否完全重合，如未完全重合，微调反射光成像相机的图像在x、y方向的位置，确定反射光成像相机需要移动的参数，再通过调整架调节反射光成像相机在x、y方向的位置；

D5，重复步骤D2-D3直至两个图像完全重合。

2.按照权利要求1所述的用于双通道FRET成像的相机安装装置的校正方法，其特征在于：透射光成像相机支架包括长度可调的可调套筒，可调套筒用于调节透射光成像相机支架的长度。

3.按照权利要求1所述的用于双通道FRET成像的相机安装装置的校正方法，其特征在于：反射光成像相机四轴可调支架还包括第四透镜套筒、第三转接件、第一锁定环、第五透镜套筒、第四转接件，第四透镜套筒安装于反射光通光孔处，调整架通过第三转接件和锁定环固定于第四透镜套筒上，调整架、伸缩套筒、第五透镜套筒和第四转接件依次连接，第四转接件用于连接反射光成像相机。