[发明专利]一种肠炎沙门氏菌胶体金免疫层析试纸条制备方法

说明书

本发明属于免疫检测技术领域，公开了一种肠炎沙门氏菌胶体金免疫层析试纸条制备方法，包括：利用优化的Tris‑base辅助法制备胶体金，并与肠炎沙门氏菌单克隆抗体偶联，得到免疫标签；将经过筛选的样品垫、固定有免疫标签的结合垫、固定有T/C线抗体的NC膜、吸水纸与PVC组装得到肠炎沙门氏菌胶体金免疫层析试纸条。本发明基于Tris辅助法制备均匀度和稳定性更好的胶体金，以此为标记物建立的肠炎沙门氏菌胶体金免疫层析试纸条，敏感性高，特异性好，重复性好，各方面性能均达到临床快速检测的要求，证明基于Tris辅助法制备的肠炎沙门氏菌胶体金免疫层析试纸条，可用于临床现场检测。

技术领域

本发明属于免疫检测技术领域，尤其涉及一种肠炎沙门氏菌胶体金免疫层析试纸条制备方法。

背景技术

目前，肠炎沙门氏菌是一种常见的人畜共患肠道病原菌，是引起急性胃肠炎的主要病原菌，可引起畜禽和人类腹泻、呕吐、发热等临床症状，严重可造成败血症、脱水、死亡。肠炎沙门氏菌也是近年来引起细菌性食物中毒等的主要原因，威胁人类健康，对国家造成了很大的经济损失，因此建立一种能够快速检测肠炎沙门氏菌的方法显得十分重要。

沙门氏菌(Salmonella)属于肠杆菌科，革兰氏阴性肠道杆菌，菌体呈椭圆形，大小为(0.6～0.9)×(1～3)微米，通常无荚膜，除个别属外都有周身鞭毛。具有菌体(O)抗原、鞭毛(H)抗原和表面(Vi)抗原3种复杂的抗原结构，有2600多种血清型。国际兽疫局将其定为B类传染病。沙门氏菌广泛存在于禽畜、鸡蛋、牛奶、牛肉和饲料中，在家禽和家禽产品中尤其常见，还能够通过食源性途径传染给人类，引起一系列胃肠道疾病，在美国，每年就有超过1500万人感染沙门氏菌。据我国2015年食源性监测报告显示，沙门氏菌是微生物性食源性疾病暴发的主要致病因子之一，因此比其他病原体对人类健康和安全的影响更大。据2018年6-10月河北省市售猪肉馅及冷鲜鸡中肠炎沙门氏菌污染情况调查与分析结果显示，沙门氏菌阳性检出率为63％，检出率较高，有较大的食品安全隐患。现有技术1从48份饲料及饲料添加剂中分理出5株沙门氏菌，检出率较高，是饲料中常见的致病菌，严重影响养殖场的健康管理。其中，肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和伤寒沙门氏菌是最为常见的沙门氏菌类型。据报道，肠炎沙门氏菌是造成畜禽发病死亡的重要因素，也是食物中毒事件的主要病原，但由于肠炎沙门氏菌血清型多样性以及与其他引起腹泻症状的病原发病症状相似，在临床症状上比较难分辨，因此对本细菌建立快速准确的检测方法就显得比较重要。

目前，肠炎沙门氏菌病原体的临床检测，大多是借助实验室诊断进行分析检测，包括肠炎沙门氏菌分离与鉴定、酶联免疫吸附试验(ELISA)、聚合酶链反应(PCR)、实时荧光定量RT-PCR和环介导等温核酸扩增技术(LAMP)等。其中肠炎沙门氏菌分离与鉴定技术仅可检测出活菌，但诊断时间较长，操作复杂，ELISA技术虽然灵敏准确，但也同样有诊断时间较长操作繁杂其需要精密仪器设备的缺点。后者几种检测方法虽然灵敏度高，特异性强，但技术门槛较高，需要专业的操作人员和设备，只适用于实验室准确检测，限制了现场和临床诊断。免疫层析检测技术(immunochromatographyassay,ICA)是1990年代兴起的快速诊断技术，是一种将色谱法和免疫学反应相结合的快速检测技术。根据信号标记物的不同，目前免疫层析技术主要包含胶体金免疫层析技术、量子点免疫层析技术、磁球免疫层析技术、荧光微球免疫层析技术、时间分辨荧光免疫层析技术等。其中胶体金免疫层析技术是比较常用的免疫层析技术，可由未经任何培训人员在现场不借助任何仪器设备完成目标成分的快速检测。传统胶体金免疫层析技术常用的金颗粒都是采用Frens法制备的，但这种方法制备的胶体金稳定性差，制备的试纸条灵敏度低，

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：现有技术制备的胶体金免疫层析试纸条稳定性差，且灵敏度低；现有技术制备的胶体金颗粒不够均一、形状不够均匀、稳定性较低。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种肠炎沙门氏菌胶体金免疫层析试纸条制备方法。