[发明专利]一种肠炎沙门氏菌胶体金免疫层析试纸条制备方法

权利要求书

1.一种肠炎沙门氏菌胶体金免疫层析试纸条制备方法，其特征在于，所述肠炎沙门氏菌胶体金免疫层析试纸条制备方法包括：利用优化的Tris-base辅助法制备胶体金，并与肠炎沙门氏菌单克隆抗体偶联，得到免疫标签；将经过筛选的样品垫、固定有免疫标签的结合垫、固定有T/C线抗体的NC膜、吸水纸与PVC组装得到肠炎沙门氏菌胶体金免疫层析试纸条。

2.如权利要求1所述肠炎沙门氏菌胶体金免疫层析试纸条制备方法，其特征在于，所述肠炎沙门氏菌胶体金免疫层析试纸条制备方法包括以下步骤：

步骤一，采用优化的Tris辅助法制备胶体金；将制备的胶体金与肠炎肠炎沙门氏菌单克隆抗体偶联制备免疫标签；

步骤二，利用复溶液将沉淀的免疫标签重悬，固定于结合垫上，干燥；

步骤三，在预先制备的NC膜上固定识别肠炎沙门氏菌不同位点的单克隆抗体和羊抗鼠多克隆抗体形成T线和C线；

步骤四，将样品垫、固定有免疫标签的结合垫、固定有T、C线的NC膜和吸水纸依次粘贴在PVC底板上并进行裁切得到胶体金层析免疫试纸条。

3.如权利要求2所述肠炎沙门氏菌胶体金免疫层析试纸条制备方法，其特征在于，所述步骤一中，采用优化的Tris辅助法制备胶体金包括：

(1)量取140mL纯净水于三颈烧瓶中，放入搅拌子，将三颈烧瓶放置在油浴锅中加热；于三颈烧瓶上方连接冷凝器，设定磁力加热搅拌器温度为137℃，搅拌转速为450rpm；

(2)当温度到达100℃，将10mL的1％柠檬酸钠溶液加入到三颈烧瓶中；继续加热40min，温度稳定于137℃，从三颈烧瓶的侧边瓶口中注入1mL的1％的氯金酸溶液；

(3)60s后，再将5mL的0.1M的Tris-base溶液快速注入三颈烧瓶中的漩涡中心处；继续反应30min后，将加热搅拌器的温度调成100℃，打开通风橱加速降温；

(4)将溶液温度降至100℃，一次性快速将1mL的1％的氯金酸注至三颈烧瓶中的漩涡中心处，继续反应30min；

(5)重复步骤(4)，反应结束后停止加热；在搅拌状态下自然冷却至室温后转移至蓝盖瓶中；4℃避光保存。

4.如权利要求2所述肠炎沙门氏菌胶体金免疫层析试纸条制备方法，其特征在于，所述步骤一中，将制备的胶体金与肠炎肠炎沙门氏菌单克隆抗体偶联制备免疫标签包括：

向制备的胶体金溶液加入K₂CO₃混匀，再加入肠炎沙门氏菌单克隆抗体、混匀，反应一段时间；

加入封闭剂将未被抗体包被的裸露的金表面位点覆盖，混匀，封闭一段时间；4℃条件下8000r/min离心15min，收集胶体金标记好的抗体，得到免疫标签。

5.如权利要求4所述肠炎沙门氏菌胶体金免疫层析试纸条制备方法，其特征在于，所述向制备的胶体金溶液加入K₂CO₃混匀，再加入肠炎沙门氏菌单克隆抗体包括：

按照每1mL胶体金加25μL的0.1M的K₂CO₃，每1mL胶体金添加2.4μg的肠炎沙门氏菌单克隆抗体的比例向胶体金溶液中加入K₂CO₃与肠炎沙门氏菌单克隆抗体。

6.如权利要求2所述肠炎沙门氏菌胶体金免疫层析试纸条制备方法，其特征在于，所述步骤二中，复溶液由pH为8.5的tris-Hcl、10％蔗糖、1％BSA以及0.5％吐温-20组成。

7.如权利要求2所述肠炎沙门氏菌胶体金免疫层析试纸条制备方法，其特征在于，所述步骤二中，利用复溶液将沉淀的免疫标签重悬，固定于结合垫上，干燥包括：

利用200μL复溶液将沉淀的免疫标签重悬，均匀滴涂在结合垫上，37℃烘干2.5h，装进密封袋内4℃保存。