[发明专利]一种敲低circXPO1的抑制剂及其在制备治疗胶质瘤药物中的应用

说明书

本发明公开一种敲低circXPO1的抑制剂及其在制备治疗胶质瘤药物中的应用。目前研究报道circXPO1的表达与骨肉瘤、肺腺癌、前列腺癌的发生有关，尚未有其对恶性胶质瘤的相关作用的报道。本发明根据circXPO1的拼接位点设计了一对shRNA，shRNA能显著抑制circXPO1的表达水平，并可以抑制神经胶质瘤的活性、增殖和迁移。

技术领域

本发明涉及分子诊断技术领域，特别涉及一种敲低circXPO1的抑制剂及其在制备治疗胶质瘤药物中的应用。

背景技术

人类胶质细胞瘤(Glioma)是中枢神经系统中最常见的原发型恶性肿瘤，占所有恶性原发性脑和中枢神经系统肿瘤的80％。根据组织学形态和分子特征，2016年世界卫生组织(WHO)重新将胶质细胞瘤分为I-IV型，其中，I型和II型常被称为低等级胶质细胞瘤(Low-grade glioma，LGG)，III型和IV型包括胶质母细胞瘤(GBM)、间变性星形细胞瘤和间变性少突胶质细胞瘤。由于胶质瘤对药物具有极大耐受性、复发率较高并且严重影响患者的生活质量，相应地也极大地缩短了病人的生存时间，所以III型和IV型胶质瘤常常被当作研究对象。低等级胶质瘤发病率较低，只占胶质瘤总数的15％，切除、放射性治疗、化学药物治疗等临床治疗方法均有较好的治疗效果，预后较佳，具有十年以上生存期的患者约占47％。恶性胶质细胞瘤是恶性程度极高的脑肿瘤之一，虽然总人口发病率仅为5.55/10万，但患者存活率只有三分之一，未作干预的患者存活时间仅为三个月，治疗后的存活时间为12-15个月，且最长不超过五年。

环状RNA(circRNA)是一类由mRNA前体反向剪接产生的共价闭合环状的编码RNA，没有3'聚腺苷酸尾巴和5'帽子结构，通常比其同源线性mRNA更加稳定，不受RNA外切酶影响，其表达具有时间和组织特异性，因此是良好的生物标志物候选分子。CircRNA分为三类：外显子circRNA(ecircRNA)，由一个或多个外显子经过反向剪接形成；内含子circRNA(ciRNA)，由内含子形成；外显子-内含子circRNA(EIciRNA)既包括外显子也包括内含子。CircRNA在多种疾病中差异性表达，并参与生理和病理生理过程的调节。CircRNAs主要通过结合miRNA使其下游靶基因免受miRNA降解、结合RNA结合蛋白(RBP)、或者通过RNA-POL II调节转录和翻译肽和蛋白质，参与中枢神经系统相关疾病以及肿瘤等过程。CircRNA生成和功能的研究涉及到了肺癌、乳腺癌、骨肉瘤、胶质瘤等肿瘤领域的方方面面。因此，circRNA可以作为治疗肿瘤的手段，进一步推动相关领域的发展。

目前研究报道circXPO1的表达与骨肉瘤、肺腺癌、前列腺癌的发生有关，尚未有其对恶性胶质瘤的相关作用的报道。经过我们的长期研究发现circXPO1的抑制剂可以作为一种活性物质，对恶性胶质瘤有一定的治疗作用。

发明内容

本发明的第一个目的是针对现有技术的不足，提供一种利用敲低circXPO1的shRNA在制备治疗胶质瘤药物或保健品中的应用，shRNA的核苷酸序列由正义链和反义链组成：

正义链的苷酸序列如SEQ ID NO.2所示：5’-GATCCGTGCGAAGTAATCTATGCCAGCCTTCCTGTCAGAGCTGGCATAGA TTACTTCGCACTTTTTG-3’；

反义链的苷酸序列如SEQ ID NO.3所示：5’-AATTCAAAAAGTGCGAAGTAATCTATGCCAGCTCTGACAGGAAGGCTGG CATAGATTACTTCGCACG-3’。

所述circXPO1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

作为优选，所述胶质瘤为胶质瘤细胞U-87MG或胶质瘤细胞U251。

本发明的第二个目的是提供一种利用敲低circXPO1的shRNA在制备胶质母细胞瘤活性抑制剂中的应用。