[发明专利]一种气道纤毛上皮细胞缺失的动物模型的构建及应用

权利要求书

1.一种Prmt5基因在肺上皮细胞中敲除后气道纤毛上皮细胞缺失的动物模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)将Prmt5^flox/flox动物和肺上皮细胞特异性表达的Cre动物杂交，获得Prmt5^flox/+;Shh;Cre基因型动物；

2) 将Prmt5^flox/+;Shh;Cre动物和Prmt5^flox/flox动物杂交，获的Prmt5基因在肺上皮细胞特异性敲除的纯合子动物；

3) Prmt5基因在肺上皮细胞特异性敲除的纯合子动物，即气道纤毛上皮细胞缺失的动物模型。

2.一种纤毛细胞缺失的3D体外类器官培养方案和培养基。

3.一种纤毛细胞缺失的2D体外类器官培养方案和培养基。

4.如权利要求3所述的3D体外培养方法，其特征在于，所述3D培养条件为：50%Matrigel培养；所述3D培养基成分为：Advanced DMEM/F-12 89%，青链霉素混合液 1%，GlutaMAX 4 mM，NaHCO₃ 3.6 mM，HEPES 15 mM，Primocin^TM 100 μg/ml，FBS 5%，EGF 25 ng/ml，Transferrin 5 μg/ml，视黄酸 50 nM，DMH-1 10 μg/ml，CHIR99021 5 μM，Y27632 5mM。

5.如权利要求4所述的2D体外培养方法，其特征在于，所述2D培养条件为：细胞在细胞培养小室中气-液交界面培养。

6.所述体外2D培养基为：Ham’s F12 45%，DMEM 45%，FBS 10%，青链霉素混合液 1%，Gluta MAX 4 mM，NaHCO₃ 3.6 mM，HEPES 15 mM，EGF 50 ng/ml，Insulin 20 ng/ml。

7.Prmt5基因在肺上皮细胞中特异性敲除在构建气道纤毛缺失动物模型中的用途。

8.一种由权利要求1-8任一所述的构建方法构建的纤毛细胞缺失模型。

9.权利要求9所述的Prmt5基因敲除动物模型在制备或筛选治疗和/或预防纤毛缺陷相关肺病的药物中的用途。

10.一种筛选治疗和/或预防纤毛缺陷相关肺病的药物的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：

1)由权利要求1-8任一所述的构建方法构建获得Prmt5基因敲除的纤毛缺失动物模型；

2)利用步骤1)制备得到的动物模型筛选对纤毛缺陷相关肺病具有治疗和/或预防效果的药物。