[发明专利]一种在微生物中用油酸调控基因表达的方法及其应用

权利要求书

1.一种重组菌，其特征在于，所述的重组菌中包含表达载体，所述的表达载体包含启动子和编码响应油酸的蛋白质的核苷酸序列；所述的启动子包括改造的porin启动子，所述改造的porin启动子为在porin启动子上加入响应油酸的蛋白质的结合位点，所述的结合位点包含SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列；所述的启动子受油酸的调控；所述的响应油酸的蛋白质为FadR；所述的重组菌为嗜盐单胞菌；所述的嗜盐单胞菌为Halomonas bluephagenesis。

2.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于，其中，加入结合位点的位置为启动子的-35区之前、-35区到-10区之间和/或-10区之后。

3.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于，调节启动子中SEQ ID NO：1的个数包括一个、两个、三个或四个以上。

4.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于，所述启动子的核苷酸序列包括SEQ IDNO：3-9或15-18中的任一项。

5.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于，所述的嗜盐单胞菌为Halomonasbluephagenesis TD01。

6.一种权利要求1-5任一所述的重组菌的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括将表达载体导入重组菌中。

7.一种在微生物中用油酸调控基因表达的方法，其特征在于，所述的方法包括将表达载体导入微生物中，培养微生物，并在培养过程中加入油酸；所述的表达载体包含启动子和编码响应油酸的蛋白质的核苷酸序列；所述的启动子包括改造的porin启动子，所述改造的porin启动子为在porin启动子上加入响应油酸的蛋白质的结合位点，所述的结合位点包含SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列；所述的启动子受油酸的调控；所述的响应油酸的蛋白质为FadR；所述的微生物为嗜盐单胞菌；所述的嗜盐单胞菌为Halomonas bluephagenesis。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，其中，加入结合位点的位置为启动子的-35区之前、-35区到-10区之间和/或-10区之后。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，调节启动子中SEQ ID NO：1的个数包括一个、两个、三个或四个以上。

10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述启动子的核苷酸序列包括SEQ IDNO：3-9或15-18中的任一项。

11.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述的嗜盐单胞菌为Halomonasbluephagenesis TD01。

12.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述油酸的加入浓度为0.5-20mM。

13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述油酸的加入浓度为1-5mM。

14.根据权利要求7或12所述的方法，其特征在于，所述油酸的加入时间为与初始培养基同时加入、与补料一同加入、在微生物生长阶段加入或者在产物合成阶段加入。

15.一种发酵方法，其特征在于，所述的发酵方法包括发酵培养权利要求1-5任一所述的重组菌。

16.根据权利要求15所述的发酵方法，其特征在于，所述的发酵过程中还包括加入油酸。

17.根据权利要求16所述的发酵方法，其特征在于，所述油酸的加入浓度为0.5-20mM。