[发明专利]一种稳定同位素标记嘧霉胺内标试剂的制备方法

说明书

本发明涉及一种食品安全检测用稳定同位素标记嘧霉胺内标试剂的制备方法，属于食品安全检测用标准物质研发领域。本发明的稳定同位素标记嘧霉胺内标试剂的制备方法，采用市售可得的中间体及稳定同位素标记卤代苯为原料，经一步Buchwald‑Hartwig交叉偶联反应直接得到稳定同位素标记嘧霉胺。本发明方法所使用的原料简单易得且价格低廉、避免使用有毒刺激性原料、合成步骤短、反应条件温和、反应收率高；最终产品副产物少、易于分离提纯、化学纯度高、同位素丰度不稀释。最终产物稳定同位素标记嘧霉胺化学纯度大于98％，同位素丰度大于98％。本制备方法制得的稳定同位素标记嘧霉胺内标试剂能满足食品安全检测用液相色谱串联质谱法所需稳定同位素标记内标试剂的技术要求。

技术领域

本发明涉及一种食品安全检测用稳定同位素标记嘧霉胺内标试剂的制备方法，属于食品安全检测用标准物质研发领域。

背景技术

嘧霉胺(Pyrimethanil，Cas No.:53112-28-0)是由法国安万特公司研发，20世纪末投入使用的一种苯氨基嘧啶类新型内吸性杀菌剂，其作用机理独特，能通过抑制病菌浸染酶的产生从而阻止病菌的侵染并杀死病菌,具有叶片穿透、根部内吸活性，对葡萄、草莓、番茄、黄瓜、洋葱、茄子及观赏植物等的灰霉病具有优异防治效果。近年来，嘧霉胺在蔬菜、茶叶等植物源性食品生产中使用量不断增加，由于其直接喷洒在农作物上，通过食用进入人体，其残留量过大不可避免的对人体健康造成危害。美国、日本和欧盟等已相继对蔬菜中嘧霉胺的最高残留量做了限量规定，欧盟也于2014年起对进口茶叶正式实施新农残限量标准，其中把嘧霉胺的残留限量规定为0.05ppm。我国也在《GB 2763-2021食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》中规定了嘧霉胺在各类食品中最高残留限量。同时，我国检测该物质的相关标准有《GB 23200.121-2021食品安全国家标准植物源性食品中331种农药及其代谢物残留量的测定液相色谱-质谱联用法》、《GB 23200.13-2016食品安全国家标准茶叶中448种农药及相关化学品残留量的测定液相色谱-质谱法》等。

因国内无相对应的稳定同位素标记内标化合物供应，而国外产品进口价格昂贵、供货周期长且供应不稳定，目前上述检测标准都采用外标法来进行定量检测。稳定同位素稀释质谱法是国际上公认的痕量检测的“金标准”，能够显著的降低基质效应，提高检测结果的精确度，使用该化合物对应的稳定同位素标记的化合物作为内标使用内标法来进行检测定量会显著提高检测结果的准确性，降低该化合物的检出限。因此，研制稳定同位素标记嘧霉胺内标试剂对于我国食品安全监督检测工作相关领域具有重要意义。

目前，现有技术中该天然丰度的化合物合成文献有很多，例如路线一：授权中国发明专利“一种嘧霉胺的制备方法”(CN 102816122 B)、“一种高纯度嘧霉胺的制备方法及用于制备高纯度嘧霉胺的设备”(CN 10461016 B)、国际专利“METHOD FOR PRODUCING(4,6-DIMETHYLPYRIMIDINE-2-YL)-PHENYLAMINE(PYRIMETHANIL)”(WO2011067362(A1))中均是以苯胺、盐酸、单氰胺、碳酸钠为原料进行加成成盐反应，合成苯基胍碳酸盐，最后与乙酰丙酮进行环合反应制得嘧霉胺。

路线二：周艳丽，薛超.杀菌剂嘧霉胺的合成研究[J].农药科学与管理，2005，26(9)：24-25.中报道的嘧霉胺的合成方法是以硝酸胍、乙酰丙酮、碳酸钾为原料先合成2-氨基-4，6-二甲基嘧啶，然后再与亚硝酸钠和稀盐酸进行重氮化反应得到2-氯-4，6-二甲基嘧啶，最后与苯胺加成得到嘧霉胺。

上述路线一中采用的原料单氰胺有毒，极刺激腐蚀皮肤、呼吸道、粘膜；路线二中苯胺的化学当量接近2当量，此两条路线均不适合用来合成稳定同位素标记嘧霉胺内标试剂。

截至目前，稳定同位素标记的嘧霉胺内标试剂的合成路线及工艺均无文献报道。