[发明专利]用于哮喘个体化用药基因检测的扩增引物组及探针、检测试剂盒、使用方法

说明书

本发明公开了用于哮喘个体化用药基因检测的扩增引物组及探针、检测试剂盒、使用方法；扩增引物组及探针包括：ADRB2‑rs1042713野生型正向引物ADRB2_F1、ADRB2‑rs1042713突变型正向引物ADRB2_F2、ADRB2‑rs1042713共用反向引物ADRB2_R、ADRB2‑rs1042713共用探针ADRB2_P；GLCCI1‑rs37973野生型正向引物GLCCI1_F1、GLCCI1‑rs37973突变型正向引物GLCCI1_F2、GLCCI1‑rs37973共用反向引物GLCCI1_R、GLCCI1‑rs37973共用探针GLCCI1_P；CRHR2‑rs7793837野生型正向引物CRHR2_F1、突变型正向引物CRHR2_F2、共用反向引物CRHR2_R、共用探针CRHR2_P；扩增引物组具有良好的扩增特异性，检测灵敏度高、检测时间短，检测成本低。

技术领域

本申请属于基因工程技术领域，具体涉及用于哮喘个体化用药基因检测的扩增引物组及探针、检测试剂盒、使用方法。

背景技术

哮喘(Asthma)，又称气喘，是一种常见的呼吸道慢性炎症疾病，主要特征是多变和复发的症状、可逆性气流阻塞和支气管痉挛。常见症状表现为喘息、咳嗽、胸腔紧迫、胸闷和呼吸困难。统计数据表明，2018年我国20岁以上人群哮喘患病率为4.2％，患者总数达4570万人，并且超过七成的患者未被诊断。

目前尚无治疗哮喘的特效办法，但坚持长期规范化治疗可使哮喘症状得到良好控制，减少复发甚至不再发作。市面上常用的抗哮喘药物主要有六大类，包括糖皮质激素类、β2受体激动剂、白三烯调节剂、茶碱类药物、抗胆碱药物、IgE抗体和酮替芬。但是，哮喘的治疗效果和不良反应在个体间存在很大的差异，造成这些差异的主要原因是每个人携带基因的不同。例如，ADRB2基因位于第五号染色体5q31-32上，编码β2肾上腺素能受体，其rs1042713位点的多态性会影响患者对β2受体激动剂的治疗效果，其中AG和GG基因型患者对β2受体激动剂的反应明显高于AA基因型患者。在中国，携带AA基因型的患者高达32.1％，对于这些患者应尽量避免沙丁胺醇等β2受体激动剂的使用，更换其他药物。同时，促肾上腺皮质素释放激素受体2由CRHR2基因编码，其rs7793837位点的多态性也会影响患者对β2受体激动剂的反应，研究表明，与携带TT和TA基因型的患者相比，携带AA基因型的患者在接受短效β2受体拮抗剂治疗时有更好的反应。另外GLCCI1 rs37973位点的多态性也影响着哮喘患者对糖皮质激素类药物的反应，AG和GG基因型患者在接受吸入性糖皮质激素治疗时发生不良反应风险的概率明显高于AA基因型患者。

目前大多研究集中于哮喘易感基因检测试剂盒的开发，抗哮喘药物相关基因的研究较为匮乏。例如，中国专利CN113215245A公开的一种用于儿童哮喘个体化用药的基因检测试剂盒及其应用，通过二代测序的方法，检测了儿童哮喘个体化用药的31个相关基因，虽然该方法精准度高，但是时效性较差、成本较高，且检测项目较为冗余。另外，中国专利CN109837339A公开了用于儿童安全用药相关基因检测的引物组、探针组、试剂盒及方法，通过TaqMAN-MGB探针分型技术检测了GLCCI1 rs37973位点的多态性，虽然该方法简单快速，但仅检测了一个与哮喘用药相关的位点，不够全面。

发明内容

有鉴于此，一方面，一些实施例公开了用于哮喘个体化用药基因检测的扩增引物组及探针，包括：ADRB2-rs1042713位点的ARMS引物组及探针、GLCCI1-rs37973位点的ARMS引物组及探针和CRHR2-rs7793837的ARMS引物组及探针；其中，

所述ADRB2-rs1042713位点的ARMS引物组及探针包括：

ADRB2-rs1042713野生型正向引物，其序列如SEQ ID NO：01所示；

ADRB2-rs1042713突变型正向引物，其序列如SEQ ID NO：02所示；