[发明专利]一种适用于链霉菌活细胞的功能核酸探针导入方法及其应用

权利要求书

1.四环素特异性分子信标核酸探针FAM-Tc-BHQ1，其特征在于：序列如下：5’-FAM-CCGGCGGGCCCCCGGCAGGCCACGGCTTGGGTTGGTCCCACTGCGCGTCCCGCCGG-BHQ1-3’。

2.一种穿膜肽-核酸适配体分子信标复合物的制备方法，其特征在于：将权利要求1所述的FAM-Tc-BHQ1与穿膜肽KH₉-BP100于室温进行混合孵育。

3.根据权利要求2所述的一种穿膜肽-核酸适配体分子信标复合物的制备方法，其特征在于：所述FAM-Tc-BHQ1与KH₉-BP100的摩尔浓度比为5μM∶25-150μM。

4.根据权利要求2所述的一种穿膜肽-核酸适配体分子信标复合物的制备方法，其特征在于：所述孵育时间为30-60min。

5.一种适用于链霉菌活细胞的功能核酸探针导入方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)将1μL FAM-aptamer/FAM-Tc-BHQ1加入至终体积100μL的缓冲液溶液中，95℃变性10min，自然冷却到室温30min，在上述体系中添加1.5μL KH₉-BP100，室温孵育30-60min以形成穿膜肽-核酸适配体分子信标复合物，将穿膜肽-核酸适配体分子信标复合物与细胞在34℃避光孵育60min。

6.根据权利要求5所述的一种适用于链霉菌活细胞的功能核酸探针导入方法，其特征在于：所述FAM-aptamer/FAM-Tc-BHQ1的浓度为50μM，所述KH₉-BP100的浓度为5mM。

7.根据权利要求5所述的一种适用于链霉菌活细胞的功能核酸探针导入方法，其特征在于：所缓冲液溶液中NaCl的终浓度为200mM，Tris-HCl的终浓度为20mM,缓冲溶液的pH为7.2。

8.根据权利要求5所述的一种适用于链霉菌活细胞的功能核酸探针导入方法，其特征在于：吸附在细胞上未进入细胞内部的穿膜肽-核酸适配体分子信标复合物以0.25％胰蛋白酶在37℃消化5min，并用上述缓冲液溶液洗涤2次。