[发明专利]一种构建杂交捕获测序文库的方法

说明书

本发明公开了一种构建杂交捕获测序文库的方法。所述方法包括以下步骤：(1)文库混合，按公式(1)计算子文库的体积，将子文库进行混合，得到混合文库；(2)文库杂交捕获，对所述混合文库进行纯化，并与杂交反应液混合进行预反应，加入捕获反应液进行捕获反应，进行洗脱及扩增，得到所述杂交捕获测序文库；本发明采用独特的杂交前文库混合策略，拓展杂交前文库混合方法的适用性，降低子文库质量、片段大小差异对预期数据产出的影响，提供了一种捕获效率高效、捕获均衡性好、操作简单且适应性广的杂交捕获方法。

技术领域

本发明属于基因检测技术领域，涉及一种构建杂交捕获测序文库的方法。

背景技术

基于二代测序的目标区域捕获方法在科研和临床基因检测领域已被广泛应用。捕获测序技术由于需要很少的测序数据量，因此不仅降低了检测成本，而且降低了数据分析过程中的计算工作量与计算时间，与全基因组测序相比，仅需相对较低的成本即可获得超高深度的测序数据，为分析低频致病突变，指导临床医生制定个性化诊疗方案提供有效信息。目前，已有大量的捕获测序方法被开发，主要是基于PCR的捕获技术与基于杂交的捕获技术。

目前主流的杂交捕获测序技术包括：罗氏的HyperCap，安捷伦的SureSelect、IDT的xGen、纳昂达的NadPrep、艾吉泰康的TargetSeq和何因生物的ProbeCap等。但现有杂交捕获技术主要存在以下缺陷：(1)杂交前子文库混合，按照子文库质量等质量混合，未考虑子文库片段大小及质量对子文库数据产出的影响；(2)杂交前子文库混合仅适用于子文库预期数据量相同的情况，不适用于子文库预期数据量不相同的情况；(3)子文库混合后，需要使用PCR Grade Water将混合文库的体积补齐至特定体积，不适用于子文库浓度低或同时杂交的子文库数量较多的情况；(4)洗脱buffer为浓缩液，使用前需要配制1X工作液，操作步骤繁琐耗时(5)未根据panel捕获区域大小，调整捕获磁珠用量；(6)25℃洗脱步骤，需要频繁涡旋混匀，操作步骤繁琐耗时，阻碍了杂交捕获测序技术的广泛应用。

综上所述，如何提供一种捕获效率高效、捕获均衡性好、操作简单且适应性广的杂交捕获方法，是基因检测技术领域亟需解决问题之一。

发明内容

针对现有技术的不足和实际需求，本发明提供一种构建杂交捕获测序文库的方法，所述方法充分分析子文库片段大小及质量对子文库数据产出的影响，设计杂交前子文库混合方法，拓展方法的适用性，提供了一种捕获效率高效、捕获均衡性好、操作简单且适应性广的杂交捕获方法。

为达上述目的，本发明采用以下技术方案：

本发明提供一种构建杂交捕获测序文库的方法，所述方法包括以下步骤：

(1)文库混合

按公式(1)计算子文库的体积，将子文库进行混合，得到混合文库，其中，V_n代表第n个子文库的体积，单位为μL；

M代表混合文库质量，单位为ng；

F_n代表第n个子文库的片段大小，单位为bp；

C_n代表第n个子文库的质量浓度，单位为ng/μL；

D_n％代表第n个子文库的校正数据量占比，计算公式为公式(2)，D_n代表第n个子文库的数据量，单位为Gb，R_n代表第n个子文库的数据量校正系数，cfDNA和gDNA类子文库的R＝1，片段主峰大小1000bp的FFPE类子文库的R＝2，片段主峰大小为500～1000bp的FFPE类子文库的R＝3，片段主峰大小＜500bp的FFPE类子文库的R＝4；

(2)文库杂交捕获