[发明专利]膀胱癌代谢组学标志物及其筛选方法

说明书

本发明公开了一种膀胱癌代谢组学标志物及其筛选方法，由尿液经改性脲酶处理得到；将交联壳聚糖与氯乙酸进行反应，使得交联壳聚糖上的羟基和氨基分别与氯乙酸上的氯原子位点反应，制得交联羧甲基壳聚糖，将交联羧甲基壳聚糖与氯化镁反应，使得壳聚糖载体上带有正电荷Mg²⁺，进而与脲酶超声处理，制得改性脲酶，通过壳聚糖载体对脲酶进行固定，能够维系住脲酶分子的构象，保证脲酶的稳定性，同时改性脲酶自身携带的Mg²⁺，能够增强脲酶活性，提升脲酶的催化速率，保证了膀胱癌代谢组学标志物筛选的准确率和筛选效率。

技术领域

本发明涉及代谢组学标志物筛选技术领域，具体涉及膀胱癌代谢组学标志物及其筛选方法。

背景技术

膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一，近几十年全球范围内，膀胱癌的发病率和死亡率逐渐上升，诊断膀胱癌常见的检查方法有尿细胞学检查、影像学检查、膀胱镜检查及活检等。尿液脱落细胞学检查和膀胱镜检查是当前首次诊断和随访膀胱癌最常用检查方法之一。

代谢组学是系统生物学中相对新兴的学科，是一个以研究细胞、组织或器官生物代谢后产生的代谢产物为研究目的科学领域。由于代谢产物相对稳定的存在于体液内，因此近年来内源性代谢谱分析更多的应用于肿瘤的早期诊断研究，而诊断膀胱癌则是通过尿液中代谢组学标志物进行诊断，而现有的膀胱癌代谢组学标志物筛选使用的脲酶，会因为活性较低，影响筛选的准确率和效率，进而影响了膀胱癌的准确诊断。

发明内容

本发明的目的在于提供膀胱癌代谢组学标志物及其筛选方法，通过改性脲酶解决了现阶段膀胱癌代谢组学标志物筛选的准确率和筛选效率较低的问题。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

一种膀胱癌代谢组学标志物，由尿液经改性脲酶处理得到；

该膀胱癌代谢组学标志物由如下步骤筛选：

步骤S1：取尿液，加入改性脲酶，震荡混匀10-15s后，在温度为37℃的条件下，进行酶解15-20min，加入甲醇，震荡混匀30-35s后，在转速为14000-14500r/min，温度为3-5℃的条件下，离心15-20min，将上清液冻干；

步骤S2：向冻干样本中加入甲氧胺溶液，震荡混匀1-1.5min，再在室温条件超声处理15-20min，再在温度为37℃的条件下，保温1.5-2h，加入N-甲基-N-(三甲基硅烷)三氟乙酰胺，震荡混匀10-15s后，继续保温1-1.5h后，在转速为14000-14500r/min，温度为3-5℃的条件下，离心10-15min，将上清液进行气相色谱-质谱处理，得到膀胱癌代谢组学标志物。

进一步，步骤S1所述的尿液与改性脲酶的用量比为1mL:15mg，步骤S2所述的甲氧胺溶液的浓度为20mg/mL。

进一步，所述的改性脲酶由如下步骤制成：

步骤A1：将乙酸溶液和壳聚糖混合，在转速为150-200r/min，温度为20-25℃的条件下，进行搅拌至壳聚糖完全溶解后，加入液态石蜡继续搅拌20-25min后，在转速为300-500r/min，温度为50-60℃的条件下，加入司盘80，继续搅拌15-20min后，滴加甲醛饱和水溶液，进行反应2-3h，制得预改性壳聚糖；

步骤A2：将预改性壳聚糖溶于乙酸溶液中，在转速为150-200r/min，温度为70-80℃的条件下，进行搅拌并加入氢氧化钠溶液，调节反应液pH值为9-10，加入环氧氯丙烷，进行反应5-7h后，过滤去除滤液，将滤饼依次用去离子水、石油醚、乙醇洗涤至中性，再将滤饼加入盐酸溶液中，在温度为90-95℃的条件下，进行保温8-10h，制得交联壳聚糖；