[发明专利]膀胱癌代谢组学标志物及其筛选方法

权利要求书

1.膀胱癌代谢组学标志物，其特征在于：由尿液经改性脲酶处理得到；

所述的改性脲酶由如下步骤制成：

步骤A1：将乙酸溶液和壳聚糖混合，搅拌至壳聚糖完全溶解后，加入液态石蜡继续搅拌，再加入司盘80，继续搅拌后，滴加甲醛饱和水溶液，进行反应，制得预改性壳聚糖；

步骤A2：将预改性壳聚糖溶于乙酸溶液中，进行搅拌并加入氢氧化钠溶液，调节反应液pH值，加入环氧氯丙烷，进行反应后，过滤去除滤液，将滤饼依次用去离子水、石油醚、乙醇洗涤至中性，再将滤饼加入盐酸溶液中，保温处理，制得交联壳聚糖；

步骤A3：将交联壳聚糖和二甲亚砜混合搅拌，加入氢氧化钠和去离子水，继续搅拌后，加入氯乙酸，升温反应，后，过滤去除滤液，将滤饼用乙醇溶液洗涤，再将滤饼溶于去离子水中，加入盐酸至产生白色絮状沉淀，将沉淀物洗涤并烘干，制得交联羧甲基壳聚糖；

步骤A4：将交联羧甲基壳聚糖溶于去离子水中，加入氯化镁，搅拌后，蒸馏去除去离子水，将底物加入磷酸缓冲液中，再加入脲酶水溶液，超声处理，制得改性脲酶。

2.根据权利要求1所述的膀胱癌代谢组学标志物，其特征在于：步骤A1所述的乙酸溶液、壳聚糖、液态石蜡、司盘80、甲醛饱和水溶液得用量比为50mL:1g:200mL:0.2mL:2mL，乙酸溶液的质量分数为4％。

3.根据权利要求1所述的膀胱癌代谢组学标志物，其特征在于：步骤A2所述的预改性壳聚糖、乙酸溶液、环氧氯丙烷的用量比为1g:50mL:4mL。

4.根据权利要求1所述的膀胱癌代谢组学标志物，其特征在于：步骤A3所述的交联壳聚糖、二甲亚砜、氢氧化钠、去离子水、氯乙酸的用量比为5g:50mL:22.5g:25mL:25mL。

5.根据权利要求1所述的膀胱癌代谢组学标志物，其特征在于：步骤A4所述的交联羧甲基壳聚糖、氯化镁、磷酸缓冲液、脲酶水溶液的用量比为1g:1.5g:10mL:10mL，脲酶水溶液的浓度为0.15mg/mL。

6.根据权利要求1所述的膀胱癌代谢组学标志物的筛选方法，其特征在于：具体包括如下步骤：

步骤S1：取尿液，加入改性脲酶，震荡混匀10-15s后，在温度为37℃的条件下，进行酶解15-20min，加入甲醇，震荡混匀30-35s后，在转速为14000-14500r/min，温度为3-5℃的条件下，离心15-20min，将上清液冻干；

步骤S2：向冻干样本中加入甲氧胺溶液，震荡混匀1-1.5min，再在室温条件超声处理15-20min，再在温度为37℃的条件下，保温1.5-2h，加入N-甲基-N-(三甲基硅烷)三氟乙酰胺，震荡混匀10-15s后，继续保温1-1.5h后，在转速为14000-14500r/min，温度为3-5℃的条件下，离心10-15min，将上清液进行气相色谱-质谱处理，得到膀胱癌代谢组学标志物。