[发明专利]超高压联合热加工破坏大豆球蛋白A2肽链的抗原区域及定位方法

说明书

本发明提供超高压联合热加工破坏大豆球蛋白A2肽链的抗原区域及定位方法，抗原区域的氨基酸序列如SEQ ID NO.17。参照已解析的大豆球蛋白三维晶体结构，以噬菌体展示技术研究加工破坏大豆球蛋白A2肽链蛋白的抗原区域，通过在噬菌体表面呈现抗原区域的蛋白，对A2亚基进行噬菌体展示的两轮筛选，找到A2肽链中的抗原优势肽段，探明超高压联合热加工降低大豆球蛋白的致敏性机理，对超高压联合热加工处理方法导致大豆球蛋白A2肽链蛋白抗原性降低的区域进行精确定位。本发明不仅为食品工业加工方法提供依据﹑快速检测出食品脱敏的应用产品，也可指导含大豆球蛋白加工类产品的安全生产，从而保障大豆球蛋白过敏人群的安全。

技术领域

本发明涉及超高压联合热加工破坏大豆球蛋白A2肽链的抗原区域及定位方法，涉及食品加工、分子生物学、免疫学及生物信息学领域。

背景技术

过敏性疾病是一种严重影响全球健康的疾病类型，食物过敏是其中的一种类型。反应的程度可以从轻微的局部症状到死亡，避免接触过敏原是唯一有效和安全的方法。患者和他们的家人被迫改变他们的饮食习惯和社会活动，这严重影响了他们的生活质量。大豆富含蛋白质，是优质蛋白质的主要来源之一，大豆中油脂含量是仅次于蛋白质的物质，其中富含优质不饱和脂肪酸，对人体心血管的健康有极大的好处。在食品界应用广泛，已被广泛用于生产面食、烘焙食品、儿童食品、健康食品等。然而，作为联合国粮农组织认可的八大食物过敏原之一，已知86％的大豆过敏是由大豆球蛋白和β-大豆球蛋白引起的。大豆球蛋白是大豆的主要储存蛋白，约占大豆种子中总蛋白的40％，其分子量为300-380kDa，由五个不同的亚基组成，每个亚基由一个酸性链A(分子量为35-43kDa)和一个碱性链B(分子量为20kDa)通过二硫键连接，这5个亚基分别是G1(A1aBb，53.6kDa)、G2(A2B1a，52.4kDa)、G3(A1Bb2，52.2kDa)、G4(A5A4B3，61.2kDa)和G5(3B4，55.4kDa)。大豆球蛋白的5个亚基都具有致敏性，其中酸性链的致敏性大于碱性链。分析大豆过敏原的致敏表位，对于正确指导安全食品的生产，预防大豆过敏性疾病的发生具有重要意义。

表位是过敏反应的物质基础，其定位技术主要有表位预测和表位定位两种，表位预测主要是依据生物学信息软件对过敏原氨基酸序列及结构进行分析，综合几种不同软件的预测，得出可能成为致敏表位的位点，这种预测方法与实际结果也许不同。B细胞抗原表位由于它独特的识别方式使得它在成为主要的抗原类型，在食品安全领域成为免疫机制和诊断的重点。随着生物技术和信息学的快速发展，对于抗原表位的预测和鉴定方法也越来越完善，避免了复杂繁冗的实验步骤和盲目性。噬菌体展示技术可用于将蛋白质目标基因与噬菌体互补DNA连接，并在噬菌体表面表达具有相对独立空间结构和生物活性的蛋白质。噬菌体是微生物群体的重要组成部分，它没有完整的细胞结构，对宿主有严格的特异性。T7噬菌体是一种小型的烈性噬菌体，能够表达不同分子量的蛋白，能够侵染大肠杆菌，其外壳蛋白由10A(344aa)和10B(397aa)组成，分子量分别为37.8kDa和43.7kDa。因此，此类技术的应用可以进一步提高对过敏机制的认识。

随着噬菌体技术的不断发展和完善，该技术在医药、食品、农业领域得到广泛的应用，包括抗生素分析的应用，生物毒素的应用，农兽药小分子的应用。到目前为止，应用噬菌体展示技术对大豆过敏原中的大豆球蛋白A2肽链抗原表位定位的研究还未见报道，特别是定位经超高压联合热加工处理破坏的过敏原表位更未见相关文献。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的是提供超高压联合热加工破坏大豆球蛋白A2肽链的抗原区域及定位方法，不仅能为食品工业加工方法提供依据﹑发展出快速检测食品脱敏有效的应用产品，也可以指导含大豆球蛋白加工类产品的安全生产，从而保障大豆球蛋白过敏人群的安全。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

超高压联合热加工破坏大豆球蛋白A2肽链的抗原区域的氨基酸序列，所述抗原区域的氨基酸序列如SEQ ID NO.17所示。

所述抗原区域用T7噬菌体展示。