[发明专利]一种橙色大白菜苗期积累类胡萝卜素的方法

权利要求书

1.一种橙色大白菜苗期积累类胡萝卜素的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、大白菜材料的准备：

选择籽粒饱满的橙色大白菜种子，55℃温汤浸种20min，清水浸泡5h，25℃下全黑暗人工气候箱中进行催芽，经4d种子露白，待种子露白直播于10×10×10cm的塑料营养钵中，转移至光照培养箱中正常生长，培养30d，等到五叶一心至八叶一心苗龄的大白菜用于后续遮光处理；

S2、大白菜遮光处理前工具的准备：

储备黑色布袋，铁丝或竹签，直尺，绑绳；

S3、开始遮光处理苗期大白菜：

选择利用黑布制作的黑布袋对五叶一心至八叶一心苗龄的大白菜进行遮光处理，然后转入光照培养箱进行培养，遮光处理25天后，幼苗内叶颜色变为橙黄色，达到了橙色大白菜成熟期内叶的色泽状态，生长周期相比大田生长至成熟期的橙色大白菜缩短了两个月；

S4、蓝光诱导大白菜内叶颜色变化：

基于橙色大白菜内叶在自然光诱导下内叶颜色由黄色变为橙色这一过程，利用不同颜色的LED灯对橙色大白菜内叶进行处理，进一步利用单色蓝光(λ＝460nm)诱导苗期大白菜1h后看其内叶颜色变化，如果由黄色变为橙色，则为橙色大白菜，反之，内叶颜色如果没有变化，则为普通大白菜；

S5、利用HPLC高效液相色谱技术测定大白菜内叶胡萝卜素含量。

2.根据权利要求1所述的一种橙色大白菜苗期积累类胡萝卜素的方法，其特征在于：所述步骤S1中供试材料为普通大白菜品系14S23，橙色大白菜品系14S837、15S1094、20S530、27-2中的一种。

3.根据权利要求1所述的一种橙色大白菜苗期积累类胡萝卜素的方法，其特征在于：所述步骤S1中种子露白直播于塑料营养钵中，转移至光照培养箱中正常生长，这一过程的培养条件为25℃下光照16h或20℃下光照8h，相对湿度65％，光照强度20000lx。

4.根据权利要求1所述的一种橙色大白菜苗期积累类胡萝卜素的方法，其特征在于：所述步骤S3的光照培养箱的培养条件为25℃下光照16h或20℃下光照8h，相对湿度为45％，光照强度20000lx。

5.根据权利要求1所述的一种橙色大白菜苗期积累类胡萝卜素的方法，其特征在于：所述步骤S5中利用HPLC高效液相色谱技术测定大白菜内叶胡萝卜素含量具体为将试验材料软叶部分2g存放于离心管，于真空冷冻干燥仪进行冻干后，放在-80℃贮藏；然后将冻干后的白菜叶片研磨并加入5mL类胡萝卜素提取液充分混匀后，提取70min，取出后12000rmp离心10min，重复操作两次后合并上清液；将上清液置于圆底烧瓶中进行35℃的减压蒸干，并用1mL乙酸乙酯进行溶解，溶解后经0.22μm有机滤头过滤到1.5mL棕色进样瓶中等待上机检测，类胡萝卜素测定参考lee，2000，采用Agilent 1260InfinityII高效液相色谱系统进行分析测定。

6.根据权利要求5所述的一种橙色大白菜苗期积累类胡萝卜素的方法，其特征在于：所述类胡萝卜素提取液为丙酮和乙醇的混合物，其中丙酮与乙醇的质量比为1:1。

7.根据权利要求5所述的一种橙色大白菜苗期积累类胡萝卜素的方法，其特征在于：采用Agilent 1260InfinityII高效液相色谱系统进行分析测定条件为C30柱(4.6mm×250mm，5μm)，检测波长为450nm，柱温为35℃，流速为1.0mL/min，样品进样量为20μL；

流动相为A相和B相，其中A相：乙腈：甲醇＝3：1(含0.01％BHT和0.05％TEA)；B相：100％MTBE(含O.01％BHT)，流速为1ml/min；

洗脱条件如下：

0min：A-B(95：5)；

0-10min：A-B(95：5)；

10—19min：A-B(86：14)；

19-29min：A-B(75：25)；

29-54min：A-B(50：50)；

54-66min：A-B(26：74)；

67min：A-B(95：5)。