[发明专利]一种免疫毒性的评价方法及模型

说明书

本发明公开了一种免疫毒性的评价方法及模型。一种免疫毒性的评价模型的构建方法，其包括以下步骤：(1)将PBMC细胞(外周血单核细胞)与KLH共同孵育，获得孵育溶液；(2)选择评价指标，对(1)中的所述孵育溶液进行检测，获取各评价指标的检测结果；(3)根据(2)得到的各种评价指标的检测结果，分析并评价免疫毒性；其中，(2)中所述评价指标包括：细胞活力和/或髓样分化因子(MyD88)的表达水平。本发明将食蟹猴外周血中的淋巴细胞与KLH共培养，最大程度的模拟了体内TDAR的情况，达到替代和优化动物使用，并且可以实现高通量筛选。

技术领域

本发明属于药物免疫毒性检测领域，具体涉及一种免疫毒性的评价方法及模型。

背景技术

免疫毒性是由于外源物质作用于机体免疫系统或细胞，出现免疫功能抑制、免疫增强、自身免疫、超敏反应及免疫原性等毒性反应。免疫毒性可表现为形态学变化，也可表现为功能性改变。按照ICH S8的标准，采用组织病理学、免疫组化、血液学和血清生化检查等可以进行初步的免疫毒性评价。而功能性变化需通过一定的技术才能检测到，如免疫细胞表型、细胞因子、局部淋巴结试验、淋巴细胞增殖试验、以及T细胞依赖性抗原抗体反应(TDAR)等进行评价。其中基于玥孔戚血蓝蛋白(KLH)的TDAR经过多个实验室的联合验证，是目前公认接受度最高的免疫毒性评价方法。

TDAR是B细胞接触T细胞依赖性抗原后产生的抗体反应，在Th2细胞的参与下并产生特异性抗体的一种免疫功能反应。近年来TDAR试验被认为是检测药物潜在免疫毒性预测性较好的功能性试验，通过人为引入外来抗原KLH并检测KLH特异性IgG抗体生成水平，反映待测物对免疫系统整体的影响，预测免疫功能的改变，并能对药物的免疫调节和免疫毒性特点进行早期预测，因此该方法在药物免疫毒理学研究中逐渐得到广泛应用。

目前的TDAR检测方法是在猴体内注射一定量(10mg/只)的KLH，KLH是T细胞依赖性抗原，首先通过抗原提呈细胞提呈并激活T细胞，进而激活B细胞，产生针对KLH的特异性抗体，通过检测特异性anti-KLH IgM和anti-KLH IgG的水平，从而评估T细胞和B细胞的功能。但是这种方法需要使用较多的实验动物，且用药量较大，评价时间较长(IgG型抗体的产生和消除均需要数周的时间)。

发明内容

本发明要解决的技术问题是为了克服现有技术中常规的TDAR试验是基于动物试验，耗时较长，还未见体外基于KLH和猴PBMC共孵育的TDAR方法的缺陷，提供一种免疫毒性的评价方法及模型。本发明的免疫毒性评价方法通过将食蟹猴外周血中的淋巴细胞与KLH共培养，最大程度的模拟了体内TDAR的情况，达到替代和优化动物使用，并且可以实现高通量筛选。

本研究首先提取猴体内的PBMC，由于PBMC中包含了不同种类的淋巴细胞，能较好的模拟体内过程，将KLH与PBMC共孵育，通过PBMC的活化效应，进而评价PBMC的功能状态。

本发明是通过下述技术方案来解决上述技术问题：

本发明第一方面提供一种免疫毒性的评价模型的构建方法，其包括以下步骤：

(1)将PBMC细胞与KLH共同孵育，获得孵育溶液；

(2)选择评价指标，对(1)中的所述孵育溶液进行检测，获取各评价指标的检测结果；

(3)根据(2)得到的各种评价指标的检测结果，分析并评价免疫毒性；

其中，(2)中所述评价指标包括：细胞活力和/或髓样分化因子的表达水平。

本发明所述的PBMC细胞较佳地来自猴血，例如食蟹猴的猴血。

在某一较佳实施方案中，所述食蟹猴为食蟹猴。

在某一较佳实施方案中，所述细胞活力通过CCK-8试剂盒或MTT试剂盒进行检测。