[发明专利]一种耐热核酸降解酶表达载体、构建方法及其应用

说明书

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种耐热核酸降解酶表达载体、构建方法及其应用。本发明的表达载体，是在酿酒酵母载体上引入重组DNase I酶基因构建而成，重组DNaseI酶基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明表达载体中的重组DNase I酶基因，是本发明首次克隆到的具有耐热属性的重组DNase I酶基因，开放阅读框序列长度为1119bp。酶耐热性分析结果表明，含有该重组基因的表达载体能够有效提高DNase I酶的热稳定性以及环境适应性，同时有助于提高重组DNase I酶活性，增强核酸污染的清除效率，有效解决PCR实验室核酸气溶胶污染去除所用酶的保存、运输和使用问题。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种耐热核酸降解酶表达载体、构建方法及其应用。

背景技术

随着新型冠状病毒检测市场需求的激增，PCR技术得到大范围的普及推广，全国各地也陆续建立起大量的PCR检测实验室。然而，在实验室日常运行中，经常会遇到核酸气溶胶污染的问题。核酸气溶胶污染，即DNA/RNA气溶胶污染，是实验室中极易出现的一种空气污染。通常情况下，空气与液体的液面摩擦、离心机离心、剧烈摇动反应管、PCR开盖、移液器反复吸样、污染物外泄等情况均会产生核酸气溶胶从而造成污染，但污染来源更多的是样本间的交叉感染。

核酸污染会造成PCR检测结果假阳性，造成检测结果不准确或无法判断，且核酸污染，尤其是阳性质粒引起的污染，很难自然降解清除，部分实验室甚至1个月也难以有效清除污染，上述情况严重影响了实验室的正常运行以及检测工作的正常开展。

核酸污染物主要为构建的含有靶基因序列的DNA质粒和高拷贝数量的DNA扩增产物。DNase I酶(Deoxyribonuclease I)中文名称为脱氧核糖核酸酶I，是一种可以消化单链或双链DNA产生单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸的核酸内切酶。DNase I可在同一位点剪切DNA双链，形成平末端，或1-2个核苷酸突出的粘末端。

目前，以DNase I酶为主要核酸降解因子，采用酶解法可以高效清除环境及物表的核酸污染物，用于预防或者清除核酸气溶胶污染。但是DNase I酶需要保存在-20℃以下，且不耐热，室温条件容易失活，65℃加热10分钟很快失活，并不利于该酶的保存及应用，极大地限制了其实际的应用范围。

因此，如何才能够提高DNase I酶的耐热稳定性，使之能够满足核酸污染清除剂的运输、保存和使用要求，成为亟待解决的技术问题。

发明内容

针对现有技术中的上述问题，本发明的目的之一在于提供一种耐热核酸降解酶表达载体，可以表达具有耐热属性以及高效的核酸内切酶活性的DNase I酶，从而提高DNaseI酶的热稳定性以及在环境中的适应性。

本发明的目的之二在于提供一种耐热核酸降解酶表达载体的构建方法，其能够有效构建得到满足热稳定性要求的耐热核酸降解酶表达载体。

本发明的目的之三在于提供一种耐热核酸降解酶表达载体的应用。

为了实现上述目的，本发明的耐热核酸降解酶表达载体所采用的技术方案是：

一种耐热核酸降解酶表达载体，所述表达载体是在酿酒酵母载体上引入重组DNase I酶基因构建而成，所述重组DNase I酶基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

本发明的耐热核酸降解酶表达载体中包含核苷酸序列如SEQ ID No.1所示的重组DNase I酶基因，该基因是本发明首次克隆到的具有耐热属性的重组DNase I酶基因，开放阅读框序列长度为1119bp。酶耐热性分析结果表明，含有该重组基因的表达载体能够有效提高DNase I酶的热稳定性以及Dnase酶在环境中的适应性，同时有助于提高酶活性，增强核酸污染的清除效率，有效解决PCR实验室核酸气溶胶污染去除所用酶的保存、运输和使用问题。

本发明的耐热核酸降解酶表达载体的构建方法，包括以下步骤：