[发明专利]特异性抗烟草PVY病毒的dsRNA及其体外合成引物和抗病性的应用

说明书

本发明公开了一种特异性抗烟草PVY病毒的dsRNA及其体外合成引物和抗病性应用，属于烟草黄瓜花叶病毒防治技术领域。本发明利用RNA沉默的原理，利用PVY病毒自身CP基因提供了一种能够特异性抗PVY病毒的dsRNA，以及这种dsRNA的体外合成方法和在烟草PVY病毒防治时的应用方法；为烟草烟草马铃薯Y病毒防治提供新思路，避免了化学用药的诸多弊端；该方法简单有效，不存在转基因安全风险，更容易进行大田推广应用；后期可以结合细胞工厂化生产dsRNA，可为烟草病毒病防治提供一种简单、有效和廉价的新方法，也可为其它植物病毒病防治提供借鉴。

技术领域

本发明属于烟草黄瓜花叶病毒防治技术领域，特别是特异性抗烟草PVY病毒的dsRNA及其体外合成引物和抗病性应用。

背景技术

烟草马铃薯Y病毒(Potato virus Y，以下简称PVY病毒)是我国烟草上的重要病害，每年造成的损失位列十大烟草侵染性病害名单前列。PVY病毒主要危害烟草、辣椒，番茄等茄科植物，属于系统性侵染病害。PVY侵染烟草时，会导致烟草的叶脉坏死、褐脉、黄斑，影响了烟叶的质量和产量。我国受PVY威胁烤烟面积年均300万亩(约20万公顷)。目前，烟草在种植、生产时，主要采取治虫防病、药剂防治等措施防治，防治效果不高。局部地区PVY暴发的情况仍然时有发生，PVY的防控仍然是烟叶生产中的一个热点和难点。

PVY病毒基因组编码一个大的多聚蛋白，长为360kD，进行翻译表达的过程中，包括经病毒自身编码的NIa、HC-Pro、PI三种蛋白酶的第一蛋白(first protein，PI)，木瓜蛋白酶相似的辅助蛋白(Helper component proteinase，HC-Pro)，与32kD大小的豌豆花叶病毒蛋白相似的第三蛋白(third protein，P3)，含有两个疏水氨基酸序列的6kD蛋白6K1和6K2，与解旋酶相似的圆柱形内含体蛋白(cylindrical protein，CI)，具有丝氨酸蛋白酶特性的核内含体蛋白a(Nuclear Inclusion body‘a’protein，NIa)，具有核定位信号的核内含体蛋白b(Nuclear Inclusion body‘b’protein，NIb)和外壳蛋白CP。黄瓜花叶病毒(cucumbermosaic virus，CMV)的基因组分别在3条正义单链的RNA分子中，编码5个蛋白，即复制酶1a、2a、2b蛋白和移动蛋白(movement protein，MP)、外壳蛋白(coat protein，CP)。其中外壳蛋白CP是PVY唯一的结合蛋白，参与到病毒传播和增殖进程，是PVY病毒病生物防治的一个理想靶基因。