[发明专利]香草扁桃酸半抗原衍生物及其合成方法，香草扁桃酸抗原及其制备方法，抗体及试剂盒

说明书

本申请涉及生物技术领域，具体公开了一种香草扁桃酸半抗原衍生物及其合成方法，香草扁桃酸抗原及其制备方法，抗体及试剂盒。一种香草扁桃酸半抗原衍生物，该衍生位点未破坏VMA原分子的羟基和羧基基团，未改变VMA分子的带电性。所述香草扁桃酸半抗原衍生物的合成方法易于操作，香草扁桃酸半抗原衍生物的收率在27.69%以上，纯度在90.56%以上。将香草扁桃酸半抗原衍生物制备成抗原、抗体，抗体可用于临床上快速检测尿液中香草扁桃酸的浓度，且香草扁桃酸抗体具有较高的特异性和准确度。

技术领域

本申请涉及生物技术领域，更具体地涉及香草扁桃酸半抗原衍生物及其合成方法，香草扁桃酸抗原及其制备方法，抗体及试剂盒。

背景技术

香草扁桃酸(Vanilmandelic acid，VMA)是肾上腺髓质激素儿茶酚胺(CA)类物质的终末代谢产物，由尿液排出。当人体患有神经鞘肿瘤如嗜络细胞瘤和神经母细胞瘤时，人体尿液中VMA的含量显著升高。在临床上，对于上述疾病24h尿液中VMA浓度的检测是一种非常有效的筛查方法。

目前，香草扁桃酸的传统检测分析主要有分光广度法，重氮法，偏高碘酸钠氧化法等，普遍存在灵敏度低等缺点。据报道，利用液相色谱串联质谱的检测检测方法检测VMA可以提高灵敏度，但是相关设备较为昂贵，且需要对样品进行衍生化和前处理，操作复杂，难以在临床大规模推广，不适合于常规筛查。此外，尿液中含有多种儿茶酚胺的代谢产物，结构上同VMA高度相似，需要一种特异性的物质准确地检测尿液中VMA的浓度。

因此，需要一种灵敏度高、特异性强和操作简单的检测方法，更加快速，更加准确地检测尿液中香草扁桃酸的浓度。

发明内容

为了给出一种灵敏度高、特异性强和操作简单的VMA的检测方法，本申请提供了一种香草扁桃酸半抗原衍生物及其合成方法，香草扁桃酸抗原及其应用。

第一方面，本申请提供了一种香草扁桃酸半抗原衍生物，其结构式如式Ⅰ所示，

本申请提出了一种香草扁桃酸半抗原衍生物。所述香草扁桃酸半抗原衍生物的衍生位点位于香草扁桃酸的甲氧基位置，该衍生位点远离香草扁桃酸的特征结构，没有破坏VMA原分子的羟基和羧基基团，避免了对VMA分子带电性的改变，未影响VMA原分子的性能。利用本申请中香草扁桃酸半抗原衍生物制备香草扁桃酸抗原，再利用香草扁桃酸抗原制备香草扁桃酸抗体，所述香草扁桃酸抗体同多种香草扁桃酸类似物没有交叉，对VMA具有较强的特异性，能够更加准确的识别尿液中VMA，具有很好的临床应用性和市场前景。

第二方面，本申请提供了一种香草扁桃酸半抗原衍生物的合成方法，包括以下步骤，S1：使3-甲氧基-4-羟基扁桃酸与氯化苄反应，得到中间体I；

S2：在-78℃至-70℃温度下，使中间体I发生亲核取代反应，得到中间体II；

S3：使中间体II与丁二酸酐反应，得到中间体III，

S4：使中间体III发生氢化还原反应，得到式I化合物。

在一个实施方案中，所述步骤S1的反应体系中，使用乙腈作为溶剂，使用碳酸钾使反应体系呈弱碱性；反应体系在室温下发生反应。

在一个实施方案中，所述步骤S2的亲核取代反应中，使用二氯甲烷作为溶剂，使用三溴化硼作为路易斯酸(Lewis酸)。

在一个实施方案中，步骤S2包括：首先称取所述中间体I，再加入二氯甲烷，在干冰丙酮浴的作用下，将体系降温到-78℃至-70℃，继续加入三溴化硼和二氯甲烷，使体系保持在-78℃至-70℃温度下发生反应；反应结束后将反应混合物加入到冰水中，最后将碳酸氢钠加入到冰水中，有固体析出，经过滤得到中间体II；