[发明专利]一种具有抗肿瘤活性的对映-贝壳杉烷型二萜化合物及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种具有抗肿瘤活性的对映‑贝壳杉烷型二萜化合物及其制备方法与应用。本发明以番荔枝果皮为原料，通过乙醇提取，硅胶柱色谱分离纯化、波谱技术解析获得该二萜化合物。活性研究表明，该二萜化合物和生物碱可通过组合协同作用减少单一化合物的给药剂量，降低药物的毒性作用。本发明所述的组合物中二萜化合物和鹅掌揪碱的摩尔比例介于6:4~9:1，最佳摩尔比例为8:2可取得很好的协同增效的作用。本发明提供的提取和制备工艺，实用性强，既实现了废弃番荔枝果皮的资源利用，又具有重要的应用价值。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种从番荔枝果皮中分离得到的对映-贝壳杉烷型二萜化合物，及其与生物碱组合后增效抗肿瘤作用的应用。

背景技术

肝癌在我国是高发癌种，因其隐匿性高，发现时多已到达晚期。对于无法手术治疗的患者，临床上常采用介入法(局部化疗)进行治疗，但是当前化疗药多为单一成分，其毒副作用严重危害了患者的健康，因此，挖掘天然产物依然是肝癌研究的重要方向。

传统文献记载番荔枝果实可治恶疮肿痛，其果皮提取物具有很好的抗肝癌活性。现代研究表明，番荔枝果皮中具有多种对映-贝壳杉烷型二萜和异喹啉型生物碱。此类化合物均具有一定的抗肿瘤活性。

番荔枝果皮作为潜在抗肝癌药材，一直作为废弃物丢弃，本发明对番荔枝果皮小极性成分进行分离，以期从中挖掘出更多抗肿瘤成分。

发明内容

发明目的：本发明的第一个目的在于从番荔枝果皮中分离得到一个新的对映-贝壳杉烷型二萜化合物(16α-17-acetoxy-18-nor-ent-kaurane-4β-ol)，分子式为C₂₁H₃₄O₃，结构式为：

本发明的第二个目的在于提供从番荔枝果皮提取分离16α-17-acetoxy-18-nor-ent-kaurane-4β-ol的制备方法，包括如下步骤：

(1)番荔枝果皮粉碎成粗粉后，提取，提取液经浓缩后以硅胶拌样并干燥成细粉，采用硅胶吸附色谱分离，石油醚-乙酸乙酯、乙酸乙酯-甲醇梯度洗脱，合并相同流分得15个部位段，编号为F1～F15；

(2)取F5部位，经干法拌样后，继续以硅胶吸附色谱分离，石油醚：丙酮系统洗脱，所得相同流分经合并为5个流分段：F5-1，F5-2，F5-3，F5-4和F5-5；5-1和F5-2段量相对较少且重叠较多，合并后以石油醚-丙酮梯度洗脱后，得对映-贝壳杉烷型二萜化合物16α-17-acetoxy-18-nor-ent-kaurane-4β-ol。

作为优选方案，以上所述的具有抗肿瘤活性的对映-贝壳杉烷型二萜化合物的提取分离方法，步骤(1)提取方法为浸渍法、渗滤法、回流法、连续回流提取法或超声提取法；提取溶剂为醇类溶剂或亲脂性溶剂。

作为优选方案，从番荔枝果皮提取分离对映-贝壳杉烷型二萜化合物16α-17-acetoxy-18-nor-ent-kaurane-4β-ol的制备方法，包括以下步骤：

(1)取风干的番荔枝果皮8kg并粉碎成粗粉，适当润湿后转移至渗漉筒中，采用10倍体积的95％EtOH室温下渗漉提取三次。合并提取液，于旋转蒸发器中减压浓缩提取液得到乙醇浸膏400g。乙醇浸膏用乙酸乙酯溶解后，以400g硅胶(100-200目)拌样成干燥细粉，采用2kg硅胶(200-300目)湿法装柱，上样后，以石油醚-乙酸乙酯(1:0，50:1，25:1，10:1，5:1，2:1，1:1，1:2，1:5，0:1)、乙酸乙酯-甲醇(100:1，50:1，10:1，0:1)梯度洗脱，每1L作为一个流分，薄层分析展板检测合并相同流分，得到15个部位段，依次编号为F1～F15。