[发明专利]补充牛磺酸的细胞培养基和使用方法

说明书

本发明涉及培养表达度普利尤单抗(dupi lumab)的真核细胞的方法，以及生产度普利尤单抗的方法。本说明书描述了包含改良的真核细胞培养基的组合物，其可用于产生感兴趣的蛋白。牛磺酸可加入无血清的培养基或化学成分确定的培养基中以增加感兴趣蛋白的产量。还包括使用培养基组合物来重组表达高水平蛋白的方法。

本申请是CN201680041992.X的分案申请。

领域

本发明涉及培养细胞和用于产生重组蛋白的培养基和方法。本发明特别地涉及用于培养重组真核细胞用于产生蛋白生物治疗剂的添加牛磺酸的培养基和其方法。

背景

有机酸牛磺酸，通常称为β-氨基酸，在大多数的组织有高浓度的分布且为氨基酸半胱氨酸的衍生物(Huxtable,RJ.,1992,Physiol Rev,72：101-163)。

牛磺酸存在许多人类和其他哺乳动物种类的组织中，例如脑、视网膜、心肌、骨骼和平滑肌、血小板和嗜中性粒细胞。牛磺酸已知用来帮助渗透压调节、膜稳定和抗发炎，以及经由防护超氧化产生的增加的电子传递链活性来调节线粒体蛋白合成(Jong等人，2010,Journal of Biomedical Science 17(Suppl 1)：S25；Jong等人，2012,Amino Acids42：2223-2232sw)。在初代神经元培养中，牛磺酸，由于其抑制谷氨酸-引发的毒性，经定性为细胞保护剂。已开发出各种包含牛磺酸用于胚胎培养的培养基。

包含氨基酸进料的细胞培养技术用于从培养细胞产生重组蛋白已有悠久历史。氨基酸为生物合成前体、能量来源、渗透物质等等，且其在生产培养中的用途与连续细胞生长和生产力系强烈相关。

然而，有助于生产力和高产率蛋白表达的生理事件不计其数，且竞争代谢活性和运送机制使得培养策略的设计变成一种挑战。氨基酸补充的类型和添加的时机也可能对培养中所产生的蛋白的质量具有影响(Altamirano,et al.,2006,Electron.J.Biotechnol.9：61-67)。副产物的累积通常成为生产细胞培养的问题，且被视为细胞培养中营养物不均衡的后果，最后抑制细胞生长(Fan,Y.等人BiotechnolBioeng.2015Mar；112(3)：521-35)。在细胞培养中已建议亚牛磺酸或其类似物或前体，以便达到降低包含重组产生的多肽的组合物颜色浓度的期望结果(WO2014145098A1,2014年9月18日公开)。促进未成熟的视网膜色素上皮细胞成熟化为成熟的视网膜色素上皮细胞的包含牛磺酸的细胞培养基已有描述(WO2013184809A1,published 12December 2013)。然而，在补充牛磺酸的培养中优化重组蛋白生产力在现有技术中尚未辨识出。增加重组表达蛋白的生产力同时将可能的有毒细胞代谢副产物例如氨减至最小的细胞培养方法为极其期望的。生产力的任何恒定增益可能等同商业规模的生物治疗产品的明显较高的供应。

因此，现有技术对于培养哺乳动物细胞的培养基和方法存在需求，其中该培养基允许健康和强健的细胞生长和维持，和高滴度产生生物医药物质。

发明概述

本发明人已惊人地发现，培养基中包含牛磺酸增加了细胞单位生产力并使这些细胞有较少的氨副产物。各种包含牛磺酸的培养策略使得蛋白产生滴度增加。此外，加入牛磺酸对于培养效能或所产生的抗体质量并无负面影响。

本发明提供用于以高产率产生治疗蛋白的方法，其包括于含有牛磺酸的培养基中培养重组细胞，其中该细胞包含编码该治疗蛋白的稳定整合的核酸。