[发明专利]补充牛磺酸的细胞培养基和使用方法

权利要求书

1.一种培养表达度普利尤单抗(dupilumab)的真核细胞的方法，包括：

(a)提供补充有约0.1mM至约10mM L-牛磺酸的基础细胞培养基；

(b)在所述基础细胞培养基中增殖或维持真核细胞以形成细胞培养物；和

(c)从细胞培养物中生产度普利尤单抗；

其中与来自在含有小于0.1mM L-牛磺酸的细胞培养基中增殖或维持的细胞的度普利尤单抗滴度相比，用约0.1mM至约10mM L-牛磺酸补充基础细胞培养基使度普利尤单抗的滴度增加至少3％。

2.根据权利要求1所述的方法，其中基础细胞培养基是化学成分确定的。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中基础细胞培养基不含血清和水解物。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中在(b)中基础细胞培养基补充有鸟氨酸、腐胺或其组合。

5.根据权利要求4所述的方法，其中基础细胞培养基补充有0.09mM至0.9mM鸟氨酸。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中基础细胞培养基包含约0.1mM至约1mML-牛磺酸、约0.5mM至约1mM L-牛磺酸、约1mM至约5mM L-牛磺酸、约1mM至约7mM L-牛磺酸或约1mM至约10mM L-牛磺酸。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其进一步包括在步骤(b)之前的生长阶段，其中生长阶段包括在未补充L-牛磺酸的基础细胞培养基中增殖或维持真核细胞。

8.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其进一步包括在步骤(b)之前的生长阶段，其中生长阶段包括在补充有约0.1mM至约10mM L-牛磺酸的基础细胞培养基中增殖或维持真核细胞。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述生长阶段包括在包含约0.1mM至约1mM L-牛磺酸、约0.5mM至约1mM L-牛磺酸、约1mM至约5mM L-牛磺酸、约1mM至约7mM L-牛磺酸或约1mM至约10mM L-牛磺酸的基础细胞培养基中增殖或维持真核细胞。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中在步骤(b)期间提供(b)的牛磺酸至少一次、至少两次、至少3次、至少4次或至少5次。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中(b)的牛磺酸每天提供。

12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中基础细胞培养基包含

(a)氨基酸的混合物，

(b)一种或多种脂肪酸，

(c)维生素和辅因子，

(d)核苷的混合物，或

(e)一种或多种二价阳离子。

13.根据权利要求12所述的方法，其中：

(a)氨基酸的混合物包含选自以下的一种或多种氨基酸：精氨酸、组氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、甘氨酸、脯氨酸、丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；

(b)一种或多种脂肪酸选自亚麻油酸、次亚麻油酸、硫辛酸、油酸、棕榈酸、硬脂酸、花生酸、花生四烯酸、月桂酸、山嵛酸、癸酸、十二酸、己酸、掬焦油酸(lignoceric acid)、肉豆蔻酸和辛酸；

(c)维生素和辅因子选自生物素、D-泛酸钙、氯化胆碱、叶酸、肌醇、烟碱酰胺、盐酸吡哆醇、核黄素、盐酸硫胺素和维生素B12；

(d)核苷的混合物包含腺苷、鸟苷、胞苷、尿苷、胸苷和次黄嘌呤中的一种或多种；或

(e)一种或多种二价阳离子包括Ca²⁺、Mg²⁺或二者。