[发明专利]一种猪干扰素α17突变体重组蛋白的制备方法与应用

权利要求书

1.一种猪干扰素α17突变体重组蛋白，其特征在于：是将SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列中第66位由亮氨酸(L)突变为苯丙氨酸(F)，第102位由谷氨酸(E)突变为天冬氨酸(D)，并在氨基酸序列C端连接氨基酸序列“QDRLRKKE”，所述突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，对应的核苷酸序列为SEQ ID NO.4所示。

2.一种猪干扰素α17突变体重组蛋白的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)将权利要求1所述的猪干扰素α17突变体蛋白两端引入限制性内切酶BamH I和HindIII酶切位点后进行基因合成，得到IFN-α17基因片段；

(2)将所述IFN-α17突变体基因片段和pVB220质粒用限制性内切酶BamH I、Hind Ⅲ酶切后纯化，纯化后的基因片段用T4连接酶连接；

(3)将T4连接酶连接后的基因片段转化DH5α感受态细胞，筛选阳性克隆，接种含氨苄的LB培养基培养，提取质粒后进行酶切鉴定，并将鉴定的阳性质粒测序，获得重组表达质粒pVB220-poIFN-α17-7m；

(4)将重组表达质粒pVB220-poIFN-α17-7m菌落接种至含氨苄的LB培养基进行温度诱导表达；

(5)培养结束后将菌液离心，收集菌体，弃上清，加入中性PBS多次洗涤菌体，离心后将菌体在缓冲液中悬浮混匀，加入PMSF和溶菌酶，冰上孵育一段时间；

(6)将菌体进行超声破碎后加入裂解液悬浮包涵体，并进行分离纯化，即得。

3.根据权利要求2所述的一种猪干扰素α17突变体重组蛋白的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中接种含氨苄的LB培养基培养的控制参数为：37℃、200rpm条件下振荡培养16-18h。

4.根据权利要求2所述的一种猪干扰素α17突变体重组蛋白的制备方法，其特征在于：所述步骤(4)中温度诱导表达的控制过程为：接种至含氨苄的LB培养基后先于37℃、180rpm条件下振荡培养16-18h，然后转接新的氨苄阳性LB培养基，并于30℃、180rpm条件下培养至菌液OD为0.6-0.8，再于42℃、200rpm条件下振荡培养4-8h。

5.根据权利要求2所述的一种猪干扰素α17突变体重组蛋白的制备方法，其特征在于：所述步骤(5)中离心操作的控制参数为：转速6000rpm，离心时间15min。

6.根据权利要求2所述的一种猪干扰素α17突变体重组蛋白的制备方法，其特征在于：所述步骤(5)中菌体与缓冲液的重量体积比为1:10。

7.根据权利要求6所述的一种猪干扰素α17突变体重组蛋白的制备方法，其特征在于：所述缓冲液按照终浓度的成分组成包括：NaH₂PO₄ 50mM，NaCl 300mM，pH＝8.0。

8.根据权利要求2所述的一种猪干扰素α17突变体重组蛋白的制备方法，其特征在于：所述步骤(5)中PMSF终浓度为1mM，溶菌酶终浓度为0.2-0.4mg/mL。

9.根据权利要求2所述的一种猪干扰素α17突变体重组蛋白的制备方法，其特征在于：所述步骤(6)中采用Ni-琼脂糖凝胶纯化柱进行重组蛋白的分离纯化。

10.权利要求1所述的猪干扰素α17突变体重组蛋白或者权利要求2～9任意一项所述的制备方法获得的猪干扰素α17突变体重组蛋白在制备抗VSV或抗PRV药物上的应用。